JUHEND

reaktiivikomplekti kasutamine valgu kolorimeetriliseks määramiseks uriinis ja tserebrospinaalvedelikus pürogallooli punase värvusega

Komplekt sisaldab:

200 ml (2 x 100 ml P + 2 x 2 ml kalibraatorit)

500 ml (2 x 250 ml P + 2 x 5 ml kalibraatorit)

Meetodi põhimõte

Kui valk reageerib pürogallooli punase ja

naatriummolübdaat moodustab värvilise kompleksi, t

mille värvi intensiivsus on kontsentratsiooniga proportsionaalne

Komplekti sisu

Reaktiiv (P) - pürogallooli punane lahus suktsinaadis

kasutusvalmis puhver.

Kalibraatorid - madala kalibreerimisvalgu lahused (0,20

g / l, mida kasutatakse mikroproteinuria määramiseks) ja kõrge

(0,50 g / l, mida kasutatakse proteinuuria määramiseks)

valgu kontsentratsioon, mis sisaldab 70% albumiini ja 30%

globuliin kasutamiseks valmis.

Ladustamiskomplekt - temperatuuril 2-8 ° C pakendis

tootja kogu säilivusaega.

Reaktiivi ja kalibraatorite stabiilsus

Pärast avamist on reaktiiv stabiilne 6 kuud, kalibraatorid - 3 kuud. kui neid hoitakse tihedalt suletud kujul temperatuuril 2–8 ° C pimedas kohas.

Normaalväärtused

• uriin - kuni 0.120 g / l (kuni 0,141 g / päevas);
• tserebrospinaalvedelik (CSF) - 0,150-0,450 g / l.

Analüüsi proovid

Uriin, hemolüüsimata CSF.

Analüüsi ettevalmistamine

1. CSF ja uriin tsentrifuugiti 10 minutit 2700-4000 pööret minutis.
2. Analüüsimiseks kasutage puhtaid, hästi pestud torusid. Katsetorude analüüsi sobivuse katse on reaktiivi värvimuutuse puudumine. Kui reaktiiv muutub proovi lisamata siniseks, hinnatakse valgu määramise tulemusi üle; seetõttu väljastage reaktiiv kõigepealt ja seejärel lisage uriin.
3. Meetodi seadistamisel tuleks kasutada uusi küvette, kuna neid ei värvita reaktiivi ja reaktsiooni prooviga. Vanad plastküvetid (hägused, läbipaistvad) ei sobi mõõtmiseks. Enne kasutamist töödelda kasutatavaid küvette järgmiselt: jätta 10 minutit pesulahuses (200 ml 5% vesinikperoksiidi lahust või 1 ml pesuvahendit), seejärel loputage kraaniga ja destilleeritud veega vähemalt 10 korda. Komplekt sobib biokeemiliste poolautomaatide ja automaatanalüsaatorite analüüsimiseks.

Analüüs Lainepikkus: 598 (578-620) nm; optilise tee pikkus: 10 mm; temperatuur: 18-25 ° C.

Reaktiivi ja kalibraatorit tuleb enne analüüsimist hoida toatemperatuuril umbes 30 minutit.

Protseduur 1 (proteinuuria määramine)

Segu segatakse 10 minutit toatemperatuuril (18-25 ° C). Mõõtke eksperimentaalsete (E) ja kalibreerimis- (EC) proovide optiline tihedus kontrollprooviga (tühi). Värv on stabiilne 1 tund.

MIS ME ME MEETME URINE SULFOSALÜÜÜLIMEETODIS?

Meie riigis kasutatakse valgu kontsentratsiooni määramiseks uriinis peamiselt esmalt Kingsbury F poolt välja pakutud turbidimeetrilist meetodit, mis kasutas sulfosalitsüülhapet (sulfosalitsüülmeetodit). B. Samal ajal ei kasuta arenenud riikide laborid seda meetodit praktiliselt, mistõttu uriiniproteiini analüüsi laborikvaliteedi kontroll näitab variatsioonikordaja vähenemist. Nii tegi 1993. Aastal 60% Prantsuse kliinilistest diagnostilistest laboritest uriiniproteiini kontsentratsiooni määramise kolorimeetrilise meetodi abil, kasutades pürogallooli punast värvi (pürogallooli meetod) ja ainult 10%, kasutades sulfosalitsüülmeetodit. Pürogallooli meetodil põhineva valgusisaldusega valgu määramiseks kasutatavad diagnostikakomplektid toodavad sellised tuntud firmad nagu Bayer D iagnostics, Beckman, Biodirect, Biocon Diagnostik, Bio-Rad Laboratories, Eurodiag, Kone, Merck, Randox, Serono, Sentinel CH, Sigma. Kahjuks on meie riigis majanduslikel põhjustel ja osaliselt kogemuste puudumise tõttu veel väga vähe kasutatud kolorimeetrilisi meetodeid uriini valgu määramiseks.

Tekib küsimus - kui põhjendatud on arenenud riikide laborite keeldumine lihtsast ja kõige tähtsamast odavast meetodist. Selle probleemi selgitamiseks võrreldi valgu kontsentratsiooni määramise tulemusi uriini uriinis kahe meetodiga: sulfosalitsüül [1] ja pürogallool [2].

Valgu kontsentratsiooni mõõtmise meetod iga meetodi puhul oli järgmine.

Reaktiivid: 3% sulfosalitsüülhappe lahus, 0,9% naatriumkloriidi lahus,

Kalibraator (seerumi albumiini kalibreerimislahus, 50 g / l naatriumkloriidi lahuses, 0,9% ja naatriumasiid, 0,095%) „Diakon DS” poolt valmistatud “Uni-Test-Total Protein” komplektist “A / Unimedi kohta ”.

Seadmed: OKB “Spectr” toodetud spektrofotomeeter SF-2000.

Mõõtmise kursus: 0,5 ml filtreeritud uriini ja 1,5 ml 3% sulfosalitsüülhappe lahust lisati kvartsküvetile optilise tee pikkusega 1 cm ja segati. 10 minuti pärast mõõdeti optiline tihedus spektrofotomeetril lainepikkusel 595 nm tühja proovi vastu (küvett 0,5 ml uriiniga ja 1,5 ml 0,9% naatriumkloriidi lahusega). Valgu kontsentratsiooni arvutamine viidi läbi vastavalt kalibreerimisgraafikule. Selle konstrueerimiseks lahjendatakse inimese seerumalbumiini standardlahust 0,9% naatriumkloriidi lahuses kontsentratsiooniga 0,025; 0,05; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9 g / l. Iga valmistatud lahuse puhul viidi mõõtmine läbi samal viisil kui uriini prooviga. Kalibreerimisgraafik on näidatud joonisel 1.

Joonis fig. 1. Kalibreerimiskõver valgu määramiseks uriinis sulfosalitsüülmeetodil.

Kasutati Biocon Diagnostik'i (Saksamaa) poolt toodetud kommertskomplekti - Fluitest USP - Protein, mis on punase pürogallooli-molübdaadi kompleksil põhinev ülitundlik meetod.

Reaktiivid: pürogalloolpunane, 0,06 mmol / l, naatriummolübdaat, 0,04 mmol / l, suktsinaatpuhver 50 mmol / l, pH 2,5, detergendid 2%; Kalibraator (seerumi albumiini kalibreerimislahus, 50 g / l naatriumkloriidi lahuses, 0,9% ja naatriumasiid, 0,095%) „Diakon DS” poolt valmistatud “Uni-Test-Total Protein” komplektist “A / Unimedi kohta ”. [3].

Varustus: biokeemiline fotomeeter StatFax 1904 Plus (“Awareness Technology inc.”, USA).

Kirjeldatud meetodi kalibreerimiskõver koos proovi / reagendi suhtega 1 / 12,5 saadi spetsiaalselt seerumi albumiini lahustega: 0,05; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0, g / l, lahjendades kalibraatorit (50 g / l) 0,9% naatriumkloriidi lahusega (joonis 2).

Joonis 2. Pürogallooli punase meetodi kalibreerimiskõver, Fluitest USP reaktiiv, Biocon Diagnostik (Saksamaa) proovi / reaktiivi suhtega 1 / 12,5.

Igast valgu lahusest võeti 80 µl ja segati 1,0 ml reagendiga; mõõdetakse uriiniproovidena.

Joonis fig. 3. Diagramm uriiniproovide valgusisalduse mõõtmise tulemuste võrreldavuse kohta sulfosalitsüül- ja pürogalloolimeetoditega.

Unimed A / O ja Biocon Diagnostik toodetud reaktiivi kalibreerimiskõver, mille proovi / reaktiivi suhe oli 1/30, saadi spetsiaalselt seerumi albumiini lahuste abil: 0,05; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0, 1,1; 1,2; 1,3; 1,4; 1,5; 1,6; 1,7; 1,75; 1,8; 1,85; 1,9; 2,0 g / l, lahjendades kalibraatorit (50 g / l) 0,9% naatriumkloriidi lahusega (joonis 4).

Joonis fig. 4. Kalibreerimiskõverad Unimed A / O reaktiivi (ülemine graafik) ja Fluitest USP komplekti Biocon Diagnostik'ist (alumine graafik) proovi / reaktiivi suhtega 1/30.

Igast valgu lahusest võeti 50 μl ja segati 1,5 ml reagendiga ning mõõdeti uriiniproovidena.

Uuringus kasutati pürogallooli meetodi maksimaalse tundlikkuse saavutamiseks selle modifitseeritud väga tundlikku varianti. Selleks on lisatud uriini kogus. Mõõtmisviis: kõigisse katseklaasidesse lisati 1 ml peamist reaktiivi, seejärel lisati esimesele katseklaasile 80 μl destilleeritud vett (tühi), ülejäänud katseklaasidesse lisati 80 μl tsentrifuugitud uriini, inkubeeriti toatemperatuuril 10 minutit ja proovi optiline tihedus mõõdeti pimekatse suhtes 600 nm lainepikkus ja 650 nm diferentsiaalfilter

Valgukontsentratsiooni määramise meetodite võrdlemiseks uriinis mõõdeti 60 patsiendi uriini proovi sulfositsüül- ja pürogalloolimeetoditega.

Valkude mõõtmise meetodite tundlikkust uriinis hinnati, uurides valmistatud uriini vesilahuseid, mis sisaldasid madalaid seerumi albumiini kontsentratsioone (0 kuni 0,05 g / l). Pürogallooli ja sulfosalitsüülmeetodite puhul uuriti ka mittespetsiifilise imendumise väärtusi uriiniproovi värvi tõttu. Selleks mõõdeti uriiniproovide optiline tihedus, milles sulfosalitsüülhappe või pürogallooli reaktiivi asemel lisati ekvivalentne kogus soolalahust.

Maatriksi (uriini) toime hindamiseks sulfosalitsüülmeetodi tulemustele viidi läbi järgmised katsed.

1) Valgu mittesisaldavates uriiniproovides lisati pürogallooli ja sulfosalitsüülmeetodite (n = 43) kohaselt inimese seerumalbumiini lõppkontsentratsioonil 0,4 g / l. Siis, kasutades ülaltoodud meetodeid, määrati valkude kontsentratsioon valmistatud proovides.

2) Uriiniproovid (n = 16), millel oli pürogallooli meetodil valk, lahjendati kaks korda 0,9% naatriumkloriidi lahusega. Saadud proovid kontrolliti uuesti sulfosalitsüülmeetodi abil, valgu kontsentratsioon arvutati uuesti lahjendamiseks.

Teadusuuringute tulemused ja arutelu

Uuringud uriini proovide kohta, mis sisaldasid spetsiifilisi albumiini kontsentratsioone, näitasid, et minimaalne tuvastatav albumiini kontsentratsioon (meetodi tundlikkus) oli 0,033 g / l sulfosalitsüülmeetodi puhul ja 0,012 g / l pürogallooli meetodi puhul.

Näidiste tulemused uriiniproovide valgusisalduse mõõtmise tulemuste võrreldavuse skeemina sulfosalitsüülhappe (ordinaattelje) ja pürogallooli (abscissa-telje) meetoditega on toodud joonisel 3. Joonisel kujutatud tahke kaldjoon vastab mõõtmistulemuste võrdsusele kahe meetodiga. Kui mõlemad meetodid andsid sarnased väärtused, siis tuleb graafiku punktid koondada tahke jooni lähedale. Joonisel fig. 3, võime ka märkida, et sulfosalitsüülmeetodil ilmnes pidevalt kõigi uriiniproovide valgu madalam kontsentratsioon võrreldes pürogallooli meetodiga.

Nagu uuring näitas, ei ole sulfosalitsüül- ja pürogalloolimeetodite abil saadud tulemuste vahel veenvat statistilist seost. Lisaks näitas sulfosalitsüülmeetod pürogallooli meetodiga võrreldes 95% uriiniproovides valgu kontsentratsiooni madalamaid väärtusi. Samal ajal andis 86% juhtudest sulfosalitsüülmeetodi abil mõõdetud tulemused kahe või enama ajaga alahinnatud tulemused võrreldes pürogallooli meetodiga.

Samal ajal näitas sulfosalitsüülmeetod mõnel juhul valgu esinemist proovis uuritud uriini tumeda värvi või suurenenud hägususe tõttu. Tehti kindlaks, et valgu määramisel sulfosalitsüülmeetodil (proovi / reaktiivi suhe = 1/3) lainepikkusel 595 nm võib uriini proovi panus selle värvi või hägususe tõttu olla 0 kuni 0,247 g / l (keskmine väärtus - 0,031 g / l). Seega tuleb tunnistada, et sulfosalitsüülmeetodi kasutamisel on kontrollproovi (uriiniproov + soolalahus) kasutamine iga uriiniproovi puhul kohustuslik. Valgu määramisel pürogallooli meetodil ei mõjutanud tulemust uriini proovi värvus või hägususe aste.

Maatriksi (uriini) mõju hindamise katse näitas, et peaaegu kõigis 0,4 g / l albumiini sisaldavates uriiniproovides oli selle kontsentratsioon sulfo-salitsüülmeetodiga määratud keskmiselt alla 0,4 g / l 20% võrra (piirväärtused) valgu kontsentratsioon 0,29-0,34 g / l). Samal ajal, kui mõõdeti valgu kontsentratsiooni nendes proovides pürogallooli meetodiga, olid kõikide proovide tulemused vahemikus 0,40-0,46 g / l. Samuti hinnati maatriksi (uriini) mõju valgu kontsentratsiooni mõõtmisel sulfosalitsüülmeetodil, et viiest 16-st kahekordselt lahjendatud uriiniproovist oli valgu kontsentratsioon 15–33% kõrgem kui vastavates lahjendamata proovides. Maatriksi mõju lõplikuks selgitamiseks sulfosalitsüülmeetodi tulemustega on vaja uurida suurt hulka uriiniproove.

Seega näitavad saadud andmed pürogallooli meetodi eeliseid sulfosalitsüülmeetodil tänu selle suuremale tundlikkusele ja mittetundlikkusele häirivate tegurite suhtes, puudub vajadus tühja uriiniproovi järele, võimalus kasutada ühte standardit kalibreerimiskõvera konstrueerimiseks ja väike kogus uriini analüüsiks. Selliste omaduste olemasolu võimaldab meil soovitada pürogallooli meetodit laialdaseks kasutamiseks laboris.

Saadud andmetest järeldub, et valgu kontsentratsiooni mõõtmine uriinis sulfosalitsüülmeetodi abil on võrreldamatu pürogallooli meetodiga saadud tulemustega. See on vastus küsimusele - miks arenenud riikide laborid ei kasuta sulfosalitsüülmeetodit. Selle meetodi rakendamine vähearenenud riikides on ilmselt seletatav asjaoluga, et hindade tegur domineerib saavutatud tulemuste täpsuse ja diagnostilise tähtsusega ning joonisel fig. 3 tulemust võib öelda ja tervet mõistust. Kes vajab sellist analüüsi, kui valgu kontsentratsioon uriinis on 0,3 g / l, võib mõõtetulemus olla 0,05 kuni 0,25 g / l? Mis puudutab hinnategurit, siis maksab see, nagu te teate, kaks korda. Analüüsi ekslikud tulemused põhjustavad patsiendi eksliku diagnoosi ja ebaefektiivse ravi. Sulfosalitsüülmeetodi kasutamise peamine oht on see, et me saame oluliselt alahinnatud väärtusi ja harva ei jäta proteinuuria. Seetõttu ei saa seda meetodit kasutada isegi sõelumiseks.

Mida me siis mõõdame sulfosalitsüülmeetodi abil? Meetod kuulub turbidimeetria klassi, mis põhineb valguse hajumise (hägusus) tõttu reaktsioonisegu valguse ülekande (D D) muutuse mõõtmisel. Valgu avastamisel uriinis tekib hägusus järgneva protsessi tõttu: happelises keskkonnas olevate uriiniproteiinide molekulid denatureeritakse, liikudes kompaktsest ümmargusest vormist lahtise “filamentse” vormini. Samal ajal suureneb konglomeraadi moodustumise võime (sadenemisreaktsioon) valkudes. Individuaalsed valgumolekulid on nähtava valguse lainepikkusest väiksemad ja seetõttu hajutavad need väga nõrgalt. Hajumise efektiivsus suureneb dramaatiliselt, kui valgu molekulide saadud konglomeraatide suurus läheneb väärtusele 0,6 μm (sondivalguse lainepikkus). Mida suurem on valgu kontsentratsioon uriinis, seda suurem on selliste konglomeraatide (hajumiskeskuste) arv. Siiski on fotomeetril mõõdetud optilise tiheduse D D ja valgusisalduse suhe uriinis väga keeruline. Reaktsiooni algstaadiumis moodustub teatud kogus väikseid valguosakesi, seejärel hakkavad nad kleepuma suuremateks osakesteks, samas kui hajumiskeskuste kontsentratsioon väheneb ja iga keskuse hajumise efektiivsus (ristlõige) suureneb. Mingil ajahetkel on reaktsioonisegus teatud arv erineva suurusega hajumiskeskusi. Valgusisalduse kõrge kontsentratsiooniga uriinis võib moodustada suuri valguosakesi, mis sadestuvad, mis viib reaktsioonisegu optilise tiheduse vähenemiseni.

Valkude denatureerimise protsess ja sadestamise reaktsioon sõltuvad söötme koostisest, milles need esinevad (pH, erinevate soolade kontsentratsioon). Meetodi kalibreerimiseks kasutame inimese albumiini vesilahust 0,9% naatriumkloriidi lisamisega. Kui mõõdame valgu kontsentratsiooni uriinis, siis me ei tea ega võta arvesse nii uriini pH-d ega selle soolakompositsiooni. Samuti ei võta me arvesse asjaolu, et erinevad valgud reageerivad sulfosalitsüülhappe lahuses erinevalt. See selgitab joonisel fig. 3. Mida lähemal on uriini koostis kalibraatori koostisele, seda täpsem on mõõtetulemus. Selliseid uriiniproove on siiski väga vähe. Enamikul juhtudel on uriini koostis selline, et mõõtmistulemused on alahinnatud ja sageli üsna olulised.

Viimast kinnitab ülalkirjeldatud katse, kus valgu kontsentratsioon mõõdeti sulfosalitsüülmeetodiga lahjendamata ja kahekordselt lahjendatud uriiniproovides. Saadud andmete võrdlus näitas, et uriini lahjendamine (võttes arvesse lahjendusastet) suurendab valgu kontsentratsiooni mõõtmistulemusi 15-33% võrra. See asjaolu kinnitab uriini koostise olulist mõju valgu kontsentratsiooni määramisele (maatriksi efekt).

Miks pürogallooli meetod võimaldab saada täpsemaid tulemusi valgu kontsentratsiooni mõõtmisel uriinis? Esiteks, tänu uriiniproovide lahjendamise suuremale hulgale reaktsioonisegus. Kui sulfosalitsüülmeetodis on uriiniproovi / reaktiivi suhe 1/3, siis pürogallooli meetodil võib see olla vahemikus 1 / 12,5 kuni 1/60, sõltuvalt tehnika variandist, mis vähendab oluliselt uriini koostise mõju mõõtetulemusele. Teiseks toimub reaktsioon suktsinaatpuhvris, st stabiilse pH juures. Ja lõpuks, meetodi põhimõte, kui seda võib öelda, on läbipaistvam. Naatriummolübdaat ja pürogalloolpunane värv moodustavad valgu molekuliga kompleksi. See toob kaasa asjaolu, et värvimolekulid ei ima vabas olekus valgust lainepikkusel 600 nm, kombineerituna valguga, neelavad valgust. Seega näeme, et tähistame iga valgu molekuli värviga ja selle tulemusena leiame, et reaktsioonisegu optilise tiheduse muutus lainepikkusel 600 nm on üheselt seotud valgu kontsentratsiooniga uriinis.

Kokkuvõttes on tabelis nr 1 toodud kõige olulisemad erinevused urosiini valgu määramiseks kasutatava sulfosalitsüülmeetodi ja pürogallooli punast värvi sisaldava meetodi vahel.

Tab. Ei. 1. Valgu määramiseks uriinis kahe meetodi võrdlusnäitajad (sulfosalitsüül- ja pürogalloolimeetodid)

Uriinvalgu määramine pürogalloolpunasega

Meetodi põhimõte põhineb värvilise kompleksi optilise tiheduse fotomeetrilisel mõõtmisel, mis on moodustunud proteiinimolekulide koosmõjust pürogalloolpunase värvikompleksi molekulidega ja naatriummolübdaadi (Pyrogallol Red-Molybdate kompleks) happelises keskkonnas. Lahuse värvi intensiivsus on proportsionaalne uuritava materjali valgusisaldusega. Detergentide olemasolu reaktiivis annab erineva iseloomuga ja struktuursete valkude ekvivalendi.

Reaktiivid. 1) pürogallooli punase (PGA) 1,5 mmol / l lahus: 60 mg PGA lahustatakse 100 ml metanoolis. Hoida temperatuuril 0–5 ° C; 2) 50 mmol / l suktsinaadi puhverlahus pH 2,5: 5,9 g merevaikhapet (HOOC-CH₂–СН₂–COOH); 0,14 g naatriumoksalaati (Na₂C₂O₄) ja 0,5 g naatriumbensoaati (C₆H₅COONa) lahustatakse 900 ml destilleeritud vees; 3) 10 mmol / l naatrium-molübdaadi kristallhüdraadi lahus (Na₂Moo₄ × 2H₂O): 240 mg naatriummolübdaati lahustatakse 100 ml destilleeritud vees; 4) Tööreagent: 900 ml suktsinaadi puhverlahusele lisatakse 40 ml PHC lahust ja 4 ml naatriummolübdaadi lahust. Lahuse pH viiakse 0,1 mol / l vesinikkloriidhappe (HCl) lahusega 2,5-ni ja selle maht reguleeritakse 1 l-ni. Selles vormis olev reaktiiv on kasutusvalmis ja on stabiilne, kui seda säilitatakse pimedas kohas ja temperatuuril 2–25 ° C 6 kuud; 5) 0,5 g / l standardse albumiini lahust.

Määratlemisviis. Esimesse katseklaasi viiakse 0,05 ml uuritud uriini, teise katseklaasi lisatakse 0,05 ml albumiini standardlahust ja kolmandasse katseklaasi (kontrollproov) 0,05 ml destilleeritud vett, seejärel lisatakse katseklaasidesse 3 ml tööreagenti. Torude sisu segatakse ja 10 minuti pärast fotometeeritakse proovi ja standardi kontrollproovi suhtes lainepikkusel 596 nm küvetis, mille optilise tee pikkus on 10 mm.

Valgu kontsentratsiooni arvutamine analüüsitud uriiniproovis viiakse läbi valemiga:

kus C on valgu kontsentratsioon analüüsitud uriiniproovis, g / l; A_pr ja a_st- uuritud uriiniproovi ja standardse albumiini lahuse väljasuremine, g / l; 0,5 - standardse albumiini lahuse kontsentratsioon, g / l.

• lahuse värv (värvikompleks) on stabiilne üks tund;
• otseselt proportsionaalne suhe valgu kontsentratsiooni proovis ja lahuse imendumise vahel sõltub fotomeetri tüübist;
• kui valgusisaldus uriinis on üle 3 g / l, lahjendatakse proovi isotoonilise naatriumkloriidi lahusega (9 g / l) ja määramist korratakse. Valgu kontsentratsiooni määramisel võetakse arvesse lahjendusastet.

Me ravime maksa

Ravi, sümptomid, ravimid

Pürogallooli punane valgu määramine uriinis

02.26.2009

Kurilyak O.A., Ph.D.

Tavaliselt eritub valk uriiniga suhteliselt väikeses koguses, tavaliselt mitte üle 100–150 mg päevas.

Terve inimese päevane diurees on 1000-1500 ml päevas; seega on valgu kontsentratsioon füsioloogilistes tingimustes 8–10 mg / dl (0,08–0,1 g / l).

Kogu uriini valku esindavad kolm peamist fraktsiooni - albumiin, mukoproteiinid ja globuliinid.

Uriini albumiin on seerumi albumiini osa, mis on glomerulites filtreeritud ja mida ei ole neerutorudes uuesti imendunud; albumiini tavalisel eritumisel uriiniga on alla 30 mg päevas. Teine suur valguallikas uriinis on neerutorud, eriti tubulite distaalne osa. Need tuubulid eraldavad kaks kolmandikku uriini valgu koguhulgast; sellest kogusest moodustab umbes 50% Tamm-Horsfalli glükoproteiini, mis eritub distaalsete tubulite epiteeli poolt ja millel on oluline roll kuseteede moodustamisel. Teised valgud esinevad uriinis väikestes kogustes ja pärinevad väikese molekulmassiga plasmavalkudest, mis on filtritud läbi neerufiltri, mis ei imendu neerutorude, neerutorude epiteeli mikroglobuliinide, samuti eesnäärme ja tupe väljavoolu suhtes.

Proteinuuria ehk valgusisalduse suurenemine uriinis on üks olulisemaid sümptomeid, mis peegeldavad neerukahjustust. Kuid mitmed teised tingimused võivad kaasneda proteinuuriaga. Seetõttu on olemas kaks peamist proteinuuria rühma: neeru (tõene) ja ekstrarenaalne (vale) proteinuuria.

Neeru proteinuuria korral siseneb valk uriinist otse verest glomerulaarfiltri läbilaskvuse suurenemise tõttu. Neeru proteinuuria esineb sageli glomerulonefriidi, nefroosi, püelonefriidi, nefroskleroosi, neeru amüloidoosi, nefropaatia erinevate vormide, näiteks rasedate nefropaatia, palaviku, hüpertensiooni jms korral. Proteinuuriat võib leida ka tervetel inimestel pärast tõsist füüsilist pingutust, hüpotermiat ja psühholoogilist stressi. Vastsündinutel täheldatakse esimestel elunädalatel füsioloogilist proteinuuria ja kui lastel ja noorukitel esineb asteeniat, on ortostaatiline proteinuuria (keha püstises asendis) võimalik koos kiire kasvuga vanuses 7 kuni 18 aastat.

Väärse (ekstrarenaalse) proteinuuria korral on uriinis leiduv valguallikas leukotsüütide, erütrotsüütide, kuseteede uroteeli epiteelirakkude segu. Nende elementide lagunemine, eriti väljendunud leeliselise uriiniga, viib valgu sattumiseni uriinini, mis on juba läbinud neerufiltri. Eriti kõrge vale proteinuuria annab verd uriinis, koos suure hematuuriaga, see võib ulatuda 30 g / l ja rohkem. Haigused, millega võivad kaasneda ekstrarenaalne proteinuuria - urolitius, neerutuberkuloos, neeru- või kuseteede kasvajad, tsüstiit, püeliit, prostatiit, uretriit, vulvovaginiit.

Kliiniline klassifikatsioon hõlmab kerget proteinuuria (vähem kui 0,5 g päevas), mõõdukas (0,5... 4 g / päevas), või raske (üle 4 g / päevas).

Enamik neeruhaigusega patsiente, nagu äge glomerulonefriit või püelonefriit, näitas mõõdukat proteinuuria, kuid nefrootilise sündroomiga patsiendid eritavad uriinis tavaliselt rohkem kui 4 g valku.

Valgu kvantitatiivseks määramiseks kasutatakse laias valikus meetodeid, eelkõige ühtse Brandberg-Roberts-Stolnikovi meetodit, biureetmeetodit, sulfosalitsüülhappe meetodit, meetodeid, mis kasutavad Coomassie sinist värvi, pürogallooli punast värvi jne.

Erinevate meetodite kasutamine valgu määramiseks uriinis on viinud tõsise segaduseni uriini valgusisalduse normi tõlgendamisel. Kuna 2 meetodit kasutatakse laborites kõige sagedamini - koos sulfosalitsüülhappe ja pürogallooli punase värviga, arvestame nende normide piiride õigsusega. Sulfosalitsüülmeetodi seisukohast normaalses uriinis ei tohiks valgusisaldus ületada 0,03 g / l ja pürogallooli seisukohast 0,1 g / l! Erinevused on kolmekordsed.

Sulfosalitsüülrühma kasutamisel uriinis valkude normaalse kontsentratsiooni madalad väärtused järgmiste punktide tõttu:

• kalibreerimiskõver põhineb albumiini vesilahusel. Uriini koostis on väga erinev veest: pH, sool, madala molekulmassiga ühendid (kreatiniin, uurea jne). Selle tulemusena võib Altshuleri, Rakovi ja Tkachevi sõnul olla uriini valgu määramise viga 3 või enam korda suurem! St õigeid tulemusi on võimalik saada ainult juhul, kui uriinil on väga väike erikaal ja selle koostis ja pH lähenevad veele;
• sulfosalitsüülmeetodi suurem tundlikkus albumiini suhtes võrreldes teiste valkudega (sel ajal, nagu eespool mainitud, ei ole albumiin normaalsetes uriiniproovides üle 30% kogu uriiniproteiinist);
• kui uriini pH nihkub leeliselisele küljele, neutraliseeritakse sulfosalitsüülhape, mis samuti vähendab valgu määramise tulemusi;
• sadestumiste settimise kiirus sõltub märkimisväärselt - madala valgu kontsentratsiooni korral aeglustub sadestumine ja reaktsiooni varajane lõpetamine viib tulemuse alahindamiseni;
• sadestamisreaktsiooni kiirus sõltub sisuliselt reaktsioonisegu segamisest. Valkude suure kontsentratsiooni korral võib tuubi tugev loksutamine põhjustada suurte helveste teket ja nende kiiret sadestumist.

Kõik ülaltoodud meetodi omadused põhjustavad uriinis määratud valgu kontsentratsiooni olulise alahindamise. Alateatamise aste sõltub tugevalt konkreetse uriiniproovi koostisest. Kuna sulfosalitsüülhappe meetod annab valgu kontsentratsiooni alahinnatud väärtuse, on selle meetodi normaalne piir ka 0,03 g / l, umbes kolm korda liiga madal võrreldes kliinilistes laboratoorsete diagnostikate välisriikide raamatutes esitatud andmetega.

Enamik lääneriikide laboritest on loobunud sulfosalitsüülmeetodi kasutamisest valgu kontsentratsiooni määramiseks uriinis ja kasutavad selleks aktiivselt pürogallooli meetodit. Pürogallooli meetod valgu kontsentratsiooni määramiseks uriinis ja teistes bioloogilistes vedelikes põhineb fotomeetrilisel põhimõttel värvitud kompleksi optilise tiheduse mõõtmisel, mis on moodustunud proteiinimolekulide koostoimes pürogalloolpunase värvi ja naatriummolübdaadi kompleksmolekulidega (Pyrogallol Red-Molybdate kompleks).

Miks pürogallooli meetod võimaldab saada täpsemaid tulemusi valgu kontsentratsiooni mõõtmisel uriinis? Esiteks, tänu uriiniproovide lahjendamise suuremale hulgale reaktsioonisegus. Kui sulfosalitsüülmeetodis on uriiniproovi / reaktiivi suhe 1/3, siis pürogallooli meetodil võib see olla vahemikus 1 / 12,5 kuni 1/60, sõltuvalt tehnika variandist, mis vähendab oluliselt uriini koostise mõju mõõtetulemusele. Teiseks toimub reaktsioon suktsinaatpuhvris, st stabiilse pH juures. Ja lõpuks võib öelda, et meetodi põhimõte on „läbipaistvam”. Naatriummolübdaat ja pürogalloolpunane värv moodustavad valgu molekuliga kompleksi. See toob kaasa asjaolu, et vabas olekus olevad värvimolekulid, mis ei absorbeeri valgust lainepikkusel 600 nm koos valguga, absorbeerivad valgust. Seega näeme, et tähistame iga valgu molekuli värviga ja selle tulemusena näeme, et reaktsioonisegu optilise tiheduse muutus lainepikkusel 600 nm korreleerub selgelt valgu kontsentratsiooniga uriinis. Pealegi, kuna pürogallooli punase afiinsus erinevatele valgu fraktsioonidele on peaaegu sama, võimaldab meetod määrata uriini valgu koguhulga. Seetõttu on uriini valgu kontsentratsiooni normaalväärtuste piiriks 0,1 g / l (see on näidatud kõigis kaasaegsetes Lääne suunistes kliiniliste ja laboratoorsete diagnostikate kohta, kaasa arvatud N. Tits'i toimetatud laboratoorsete testide kliiniline käsiraamat). Pürogallooli ja sulfosalitsüüli meetodite võrdlevad omadused uriini valgu määramiseks on esitatud tabelis 1.

Kokkuvõttes tahaksin veelkord keskenduda asjaolule, et kui laboratoorium läheb urosvalgu määramiseks sulfosalitsüülmeetodist pürogallooli meetodisse, suureneb normaalväärtuste piir oluliselt (0,03 g / l kuni 0,1 g / l!). See laboratooriumipersonal peaks kindlasti arstidele teatama, sest Sellises olukorras saab proteinuuria diagnoosi teha ainult juhul, kui valgusisaldus uriinis ületab 0,1 g / l.

3. Valgu määramine.

Meetodi põhimõte mis põhineb valgu koagulatsioonil uriinis lämmastiku (või 20% sulfosalitsüülhappe lahuse) juuresolekul.

Töö edenemine: kuni 5 tilka uriini lisada 1-2 tilka lämmastikhapet (või sulfosalitsüülhapet). Valgu juuresolekul uriinis ilmneb hägusus.

Tabel Uriini patoloogiliste komponentide tuvastamine.

Märkus: uuritud uriinis sisalduva glükoosi ja valgu juures määratakse nende kvantitatiivne sisaldus.

Valgu kvantitatiivne määramine uriinis kolorimeetrilise meetodiga pürogalloolpunasega.

Meetodi põhimõte: Kui valk reageerib pürogallooli punase ja naatriummolübdaadiga, moodustub värviline kompleks, mille intensiivsus on proportsionaalne valgu kontsentratsiooniga proovis.

Reaktiivid: Tööreagens - pürogallooli punane lahus suktsinaatpuhvris, kalibreerimisvalgu lahus kontsentratsiooniga 0,50 g / l

Proovid segatakse, hoidke 10 minutit. toatemperatuuril (18-25 ° C). Mõõdetakse kogutud optiline tihedus (D_op) ja kalibreerimisproov (D_kuni) kontrollproovi vastu λ = 598 (578-610) nm juures. Värvus on stabiilne 1 tund.

Arvutamine: valgu kontsentratsioon uriinis (C) g / l arvutatakse järgmise valemi abil:

Normaalväärtused: kuni 0,094 g / l (0,141 g / päevas)

Glükoosi kvantitatiivne määramine uriinis glükoosi oksüdaasi meetodil.

Meetodi põhimõte: Kui D-glükoosi oksüdeeritakse atmosfääri hapnikuga glükoosi oksüdaasi toimel, moodustub ekvimolaarne kogus vesinikperoksiidi. Peroksidaasi toimel oksüdeerib vesinikperoksiid värvilise toote moodustamisega kromogeenseid substraate (fenooli ja 4-aminoantipiriini - 4ААP segu). Värvi intensiivsus on proportsionaalne glükoosi sisaldusega.

2 N₂Oh₂ + fenool + 4ААП värviline ühend + 4Н₂Oh

Töö edenemine: 1 ml töölahust ja 0,5 ml fosfaatpuhvrit viiakse kahte torusse. Esimese katseklaasi lisatakse 0,02 ml uriini ja teisele lisatakse 0,02 ml kalibraatorit (kalibreerimine, glükoosi standardlahus, 10 mmol / l). Proove segatakse, inkubeeritakse 15 minutit temperatuuril 37 ° C termostaadis ja optilist tihedust mõõdetakse katseliselt (D_op) ja kalibreerimine (D_kuni) proovid tööreagendi suhtes lainepikkusel 500-546 nm.

Glükoosi sisaldus uriini päevases annuses määratakse mmol / päevas, korrutades saadud koguse uriini kogusega päevas.

Märkus Kui suhkru sisaldus uriinis tuleb lahjendada rohkem kui 1%.

Praegu kasutavad biokeemilised laborid glükoosi uriini analüüsimiseks ühtset ekspressmeetodit, kasutades reaktiivset glükoosikatse glükoositesti või kasutades kombineeritud testribasid pH, valgu, glükoosi, ketooni ja verega. Testribad, mis on kastetud anumasse uriiniga 1 sekund. ja võrdle skaala värvi.

Arst Hepatiit

maksa ravi

Normvalk uriinpürogallooli meetodis

Terve inimene toodab 1,0-1,5 liitrit uriini päevas. Selles sisalduv valgu sisaldus 8–10 mg / dl on füsioloogiline nähtus. Valgu päevane tarbimine uriinis 100-150 mg ei tohi põhjustada kahtlust. Globuliin, mukoproteiin ja albumiin moodustavad uriinis kokku valgu. Suur albumiini väljavool näitab filtreerimisprotsessi rikkumist neerudes ja seda nimetatakse proteinuuriaks või albumiiniaks.

Igale uriinis olevale ainele antakse "tervislik" kiirus ja kui valguindeks muutub, võib see viidata neerude patoloogiale.

Uriinianalüüs hõlmab kas esimese (hommikuse) osa kasutamist või iga päev proovi võtmist. Viimane on eelistatud proteinuuria taseme hindamiseks, kuna valgusisaldusel on väljendunud päevased kõikumised. Uriini kogutakse päeva jooksul ühte konteinerisse, mõõdetakse kogumaht. Uriinvalgu analüüsi läbiviiva laboratooriumi puhul on selles mahutis piisav standardproov (50-100 ml), ülejäänud kogus ei ole vajalik. Lisateabe saamiseks tehakse Zimnitsky kohta täiendav test, mis näitab, kas uriini näitajad päevas on normaalsed.

Tagasi sisukorda

Uriinis sisalduv valk on täiskasvanutel normaalne, ei tohi ületada 0,033 g / l. Samal ajal ei ületa päevamäär 0,05 g / l. Rasedate naiste puhul on uriinis sisalduvate valkude sisaldus rohkem - 0,3 g / l. Ja hommikul on uriin sama - 0,033 g / l. Valgu standardid erinevad uriini ja laste üldise analüüsi poolest: 0,036 g / l hommikul ja 0,06 g / l päevas. Kõige sagedamini teevad laborid analüüsi, kasutades kahte meetodit, mis näitavad, kui palju valgu fraktsiooni uriinis sisaldub. Ülaltoodud normaalväärtused kehtivad sulfosalitsüülhappega tehtud analüüsi jaoks. Pürogallooli punase värvi kasutamisel on väärtused kolm korda erinevad.

Tagasi sisukorda

Valgu põhjus uriinis võib olla patoloogiline protsess neerudes:

• filtreerimine neerude glomerulites läheb valesti;
• imendumine valgu tubulites on halvenenud;
• Mõnedel haigustel on neerudele tugev koormus - kui veres olev valk on suurenenud, ei ole neerudel lihtsalt aega selle filtreerimiseks.

Ülejäänud põhjused loetakse mittepiiravateks. Nii areneb funktsionaalne albuminuuria. Uriini analüüsil esinev valk ilmneb allergilistes reaktsioonides, epilepsias, südamepuudulikkuses, leukeemias, mürgistuses, müeloomis, kemoteraapias, süsteemsetes haigustes. Kõige sagedamini on see patsientide analüüside näitaja hüpertensiivse haiguse esimene kell.

Uriinivalgu suurenemine võib olla tingitud mitte-patoloogilistest teguritest, mistõttu on vaja täiendavaid analüüse.

Kvantitatiivsed meetodid valgu määramiseks uriinis annavad vigu, mistõttu on soovitatav teha mitu analüüsi ja seejärel kasutada õige valemi arvutamiseks valemit. Uriini valgusisaldust mõõdetakse g / l või mg / l. Need valgu näitajad võimaldavad määrata proteinuuria taset, põhjendada, hinnata prognoosi ja määrata strateegia.

Tagasi sisukorda

Keha täielikuks toimimiseks on vajalik pidev vahetus vere ja kudede vahel. On võimalik ainult siis, kui veresoontes on teatud osmootne rõhk. Vereplasma valgud säilitavad niisuguse surve taseme, kui madalmolekulaarsed ained liiguvad keskkonda kergesti nende kõrge kontsentratsiooniga madalama kontsentratsiooniga söötmesse. Valgumolekulide kadumine viib vere vabanemisest voodist koesse, mis on täis tugevat turset. See on mõõduka ja raske proteinuuria ilming.

Albuminuuria algstaadiumid on asümptomaatilised. Patsient pöörab tähelepanu ainult põhihaiguse ilmingutele, mis on uriini valgu põhjuseks.

Mõningate toodete kasutamise tõttu nimetatakse proteiiniuria jälgedes uriinisisalduse suurenemist

Uriini analüüsimiseks kogutakse puhas, kooritud mahuti. Enne tualeti kogumist on näidatud perineum, peate pesema seebi ja veega. Naistel soovitatakse tupe sulgeda puuvilla või tampooniga nii, et tupe väljutamine ei mõjutaks tulemust. Eelõhtul on parem mitte juua alkoholi, mineraalvett, kohvi, vürtsikat, soolast ja toitu, mis annab uriini värvi (mustikad, peet). Tugev füüsiline koormus, pikaajaline kõndimine, stress, palavik ja higistamine, valgusisaldusega toiduainete või ravimite liigne tarbimine enne uriini manustamist tekitavad valgu ilmumist täiesti terve inimese uriinianalüüsil. Seda lubatavat nähtust nimetatakse jälgitavaks proteinuuriaks.

Tagasi sisukorda

Neeruhaigus, mis põhjustab valgu kadu:

• Amüloidoos. Neerude normaalsed rakud asendatakse amüloididega (valk-sahhariidi kompleks), mis takistab keha normaalset töötamist. Proteiureetilisel etapil ladestuvad amüloidid neerukudedesse, hävitades nefroni ja selle tulemusena neerufiltri. Seega saab valk verest uriinile. See etapp võib kesta kauem kui 10 aastat.
• Diabeetiline nefropaatia. Süsivesikute ja lipiidide ebaõige metabolismi tõttu hävitatakse neerudes veresooned, glomeruloosid ja tubulid. Valk uriinis on esimene märk diabeedi eeldatavast komplikatsioonist.
• Põletikulise geneesi haigused - nefriit. Kõige sagedamini mõjutavad kahjustused veresooni, glomeruli ja püelokalikulaarsüsteemi, häirides filtreerimissüsteemi normaalset kulgu.
• Glomerulonefriit on enamikul juhtudel autoimmuunne. Patsient kaebab uriini koguse vähenemise, alaseljavalu ja rõhu suurenemise pärast. Glomerulonefriidi raviks soovitame kasutada dieeti, raviskeemi ja ravimiravi.
• Püelonefriit. Ägeda perioodi jooksul ilmnevad bakteriaalse infektsiooni sümptomid: külmavärinad, iiveldus, peavalu. See on nakkushaigus.
• Polütsüstiline neeruhaigus.

Tervetel kehadel ei ole valgumolekulid (ja need on küllaltki suured) neerude filtreerimissüsteemi läbima. Seetõttu ei tohiks uriinis sisalduv valk olla. See näitaja on sama nii meestele kui naistele. Kui analüüs näitab proteinuuria, on oluline konsulteerida arstiga põhjustel. Spetsialist hindab, kui suur on valgu tase, kas kaasneb ka kaasnev patoloogia, kuidas taastada keha normaalne toimimine. Statistika kohaselt on naistel suurem urogenitaalhaiguse risk kui meestel.

Meetodi põhimõte mis põhineb valgu koagulatsioonil uriinis lämmastiku (või 20% sulfosalitsüülhappe lahuse) juuresolekul.

Töö edenemine: kuni 5 tilka uriini lisada 1-2 tilka lämmastikhapet (või sulfosalitsüülhapet). Valgu juuresolekul uriinis ilmneb hägusus.

Tabel Uriini patoloogiliste komponentide tuvastamine.

Märkus: uuritud uriinis sisalduva glükoosi ja valgu juures määratakse nende kvantitatiivne sisaldus.

Meetodi põhimõte: Kui valk reageerib pürogallooli punase ja naatriummolübdaadiga, moodustub värviline kompleks, mille intensiivsus on proportsionaalne valgu kontsentratsiooniga proovis.

Reaktiivid: Tööreagens - pürogallooli punane lahus suktsinaatpuhvris, kalibreerimisvalgu lahus kontsentratsiooniga 0,50 g / l

Proovid segatakse, hoidke 10 minutit. toatemperatuuril (18-25 ° C). Mõõtke eksperimentaalse (Dop) ja kalibreerimisproovi (Dk) optiline tihedus kontrollproovi suhtes λ = 598 (578-610) nm juures. Värvus on stabiilne 1 tund.

Arvutamine: valgu kontsentratsioon uriinis (C) g / l arvutatakse järgmise valemi abil:

kus: Dop = Dk = C = g / l.

Normaalväärtused: kuni 0,094 g / l (0,141 g / päevas)

Meetodi põhimõte: Kui D-glükoosi oksüdeeritakse atmosfääri hapnikuga glükoosi oksüdaasi toimel, moodustub ekvimolaarne kogus vesinikperoksiidi. Peroksidaasi toimel oksüdeerib vesinikperoksiid värvilise toote moodustamisega kromogeenseid substraate (fenooli ja 4-aminoantipiriini - 4ААP segu). Värvi intensiivsus on proportsionaalne glükoosi sisaldusega.

Glükoos + O2 + H2O glükonolaktoon + H2O2

2H2O2 + fenool + 4AAP värviline ühend + 4H2O

Töö edenemine: 1 ml töölahust ja 0,5 ml fosfaatpuhvrit viiakse kahte torusse. Esimese katseklaasi lisatakse 0,02 ml uriini ja teisele lisatakse 0,02 ml kalibraatorit (kalibreerimine, glükoosi standardlahus, 10 mmol / l). Proove segatakse, inkubeeritakse 15 minutit temperatuuril 37 ° C termostaadis ning katselise (Dop) ja kalibreerimise (Dk) proovide optiline tihedus tööreagendi suhtes mõõdetakse lainepikkusel 500-546 nm.

Arvutamine: C = Dop / Dk  10 mmol / l Dop = Dk =

Glükoosi sisaldus uriini päevases annuses määratakse mmol / päevas, korrutades saadud koguse uriini kogusega päevas.

Märkus Kui suhkru sisaldus uriinis tuleb lahjendada rohkem kui 1%.

Praegu kasutavad biokeemilised laborid glükoosi uriini analüüsimiseks ühtset ekspressmeetodit, kasutades reaktiivset glükoosikatse glükoositesti või kasutades kombineeritud testribasid pH, valgu, glükoosi, ketooni ja verega. Testribad, mis on kastetud anumasse uriiniga 1 sekund. ja võrdle skaala värvi.

Valgu määramine pürogallooli punase indikaatoriga

Meetodi põhimõte põhineb värvilise kompleksi optilise tiheduse fotomeetrilisel mõõtmisel, mis on moodustunud proteiinimolekulide koosmõjust pürogalloolpunase värvikompleksi molekulidega ja naatriummolübdaadi (Pyrogallol Red-Molybdate kompleks) happelises keskkonnas. Lahuse värvi intensiivsus on proportsionaalne uuritava materjali valgusisaldusega. Detergentide olemasolu reaktiivis annab erineva iseloomuga ja struktuursete valkude ekvivalendi.

Reaktiivid. 1) pürogallooli punase (PGA) 1,5 mmol / l lahus: 60 mg PGA lahustatakse 100 ml metanoolis. Hoida temperatuuril 0–5 ° C; 2) 50 mmol / l suktsinaadi puhverlahus pH 2,5: 5,9 g merevaikhapet (HOOC-CH2-CH2-COOH); 0,14 g naatriumoksalaati (Na2C2O4) ja 0,5 g naatriumbensoaati (C6H5COONa) lahustatakse 900 ml destilleeritud vees; 3) 10 mmol / l naatrium-molübdaadi kristallhüdraadi lahus (Na2Mo04 × 2H2O): 240 mg naatriummolübdaati lahustatakse 100 ml destilleeritud vees; 4) Tööreagent: 900 ml suktsinaadi puhverlahusele lisatakse 40 ml PHC lahust ja 4 ml naatriummolübdaadi lahust. Lahuse pH viiakse 0,1 mol / l vesinikkloriidhappe (HCl) lahusega 2,5-ni ja selle maht reguleeritakse 1 l-ni. Selles vormis olev reaktiiv on kasutusvalmis ja on stabiilne, kui seda säilitatakse pimedas kohas ja temperatuuril 2–25 ° C 6 kuud; 5) 0,5 g / l standardse albumiini lahust.

Määratlemisviis. Esimesse katseklaasi viiakse 0,05 ml uuritud uriini, teise katseklaasi lisatakse 0,05 ml albumiini standardlahust ja kolmandasse katseklaasi (kontrollproov) 0,05 ml destilleeritud vett, seejärel lisatakse katseklaasidesse 3 ml tööreagenti. Torude sisu segatakse ja 10 minuti pärast fotometeeritakse proovi ja standardi kontrollproovi suhtes lainepikkusel 596 nm küvetis, mille optilise tee pikkus on 10 mm.

Valgu kontsentratsiooni arvutamine analüüsitud uriiniproovis viiakse läbi valemiga:

C = 0,5 × Apr / Ast,

kus C on valgu kontsentratsioon analüüsitud uriiniproovis, g / l; Apr ja Ast - uuritud uriiniproovi ja standardse albumiini lahuse väljasuremine, g / l; 0,5 - standardse albumiini lahuse kontsentratsioon, g / l.

• lahuse värv (värvikompleks) on stabiilne üks tund;
• otseselt proportsionaalne suhe valgu kontsentratsiooni proovis ja lahuse imendumise vahel sõltub fotomeetri tüübist;
• kui valgusisaldus uriinis on üle 3 g / l, lahjendatakse proovi isotoonilise naatriumkloriidi lahusega (9 g / l) ja määramist korratakse. Valgu kontsentratsiooni määramisel võetakse arvesse lahjendusastet.

• Uriinvalgu määramine
• Ühtne sulfostsüülhappe uuring
• Ühendatud Brandberg - Roberts - Stolnikovi meetod
• Valgu koguse määramine uriinis reageerimisel sulfosalitsüülhappega
• Biureti meetod
• Bens - Jones'i valgu avastamine uriinis

Proteinuuria on nähtus, kus uriinis tuvastatakse valk, mis näitab neerukahjustuse võimalust, toimib südamehaiguste, veresoonte, lümfisoonte arengu faktorina.

Valgu tuvastamine uriinis ei tähenda alati haigust. Sarnane nähtus on tüüpiline isegi täiesti tervetele inimestele, kelle uriiniproteiini saab avastada. Hüpotermia, füüsiline koormus, valgusisaldusega toiduainete tarbimine toob kaasa valgu ilmumise uriinis, mis kaob ilma ravita.

Sõeluuringu ajal määrab valku 17% praktiliselt tervetest inimestest, kuid ainult 2% sellest inimesest näitas positiivset testitulemust neeruhaiguse märgina.

Valgumolekulid ei tohi vere sattuda. Nad on keha jaoks eluliselt olulised - nad on rakkude ehitusmaterjalid, osalevad reaktsioonides nagu koensüümid, hormoonid, antikehad. Nii meestel kui naistel on uriinis valkude täielik puudumine.

Neerud teevad valgu molekulide kadumise organismis ära hoidmise funktsiooni.

Uriini filtreerimisega on seotud kaks neerude süsteemi:

1. glomeruloosid - ei lase suurtes molekulides, kuid ei hoia albumiini, globuliine - väikest osa valgu molekulidest;
2. neerutorud - adsorbeeritud valgud filtreeritud glomerulid, naasevad vereringesse.

Uriinis leidub albumiini (umbes 49%), mukoproteiine, globuliine, millest immunoglobuliinide osakaal moodustab umbes 20%.

Globuliinid - suure molekulmassiga vadakuvalk, mida toodetakse immuunsüsteemis ja maksas. Enamik neist sünteesitakse immuunsüsteemi poolt, viitab immunoglobuliinidele või antikehadele.

Albumiinid on osa valkudest, mis esmalt ilmuvad uriinis isegi väikese neerukahjustusega. Terves uriinis on teatud kogus albumiini, kuid see on nii väike, et seda ei ole võimalik laboratoorsete diagnostikate abil tuvastada.

Madalam künnis, mida saab laboratoorsete diagnostikate abil tuvastada, on 0,033 g / l. Kui päevas kaotatakse rohkem kui 150 mg valku, räägivad nad proteinuuriast.

Põhilised uriiniproteiini andmed

Kerge proteinuuriaga haigus on asümptomaatiline. Visuaalselt ei saa eristada valkuvaba uriini uriinist, milles on väike kogus valku. Mõnevõrra vahtne uriin muutub juba suurel määral proteinuuriaga.

Võib oletada, et valk eritub uriinis aktiivselt patsiendi välimusega ainult mõõduka või raske haiguse astmega, mis on tingitud jäsemete, näo, kõhu turse.

Haiguse varases staadiumis võivad proteinuuria kaudsed nähud olla järgmised:

• uriini värvimuutus;
• kasvav nõrkus;
• isu puudumine;
• iiveldus, oksendamine;
• luuvalu;
• unisus, pearinglus;
• kõrgendatud temperatuur.

Selliste nähtude ilmnemist ei saa eirata, eriti raseduse ajal. See võib tähendada pisut kõrvalekaldumist normist ja see võib olla preeklampsia, preeklampsia tekkimise sümptom.

Valgu kadu kvantifitseerimine ei ole kerge ülesanne, et saada täielikum ülevaade patsiendi seisundist, kasutatakse mitmeid laborikatseid.

Raskused valgu liigse valgu tuvastamiseks uriinis on seletatavad:

• madala valgusisaldusega kontsentratsioon, mille tunnustamiseks on vaja kõrge täpsusega instrumente;
• uriini koostis, mis raskendab ülesannet, kuna see sisaldab aineid, mis moonutavad tulemust.

Suurimat teavet annab uriini esimese hommikuse osa analüüs, mis kogutakse pärast ärkamist.

Analüüsi eelõhtul peavad olema täidetud järgmised tingimused:

• Ärge sööge vürtsikat, praetud, valgu toitu, alkoholi;
• välistada diureetikum 48 tunni jooksul;
• piirata kehalist aktiivsust;
• järgige hoolikalt isikliku hügieeni reegleid.

Hommikune uriin on kõige informatiivsem, kuna see on põie pikaajaline, vähem sõltuv toidutarbimisest.

Valgu kogust uriinis saab analüüsida juhusliku osaga, mis võetakse igal ajal, kuid see analüüs on vähem informatiivne, seda suurem on vea tõenäosus.

Igapäevase valgu kadu kvantifitseerimiseks tehakse igapäevase uriini üldine analüüs. Selleks 24 tunni jooksul koguti spetsiaalsesse plastpakendisse kogu päevale eraldatud uriin. Võite koguda igal ajal. Peamine tingimus - täpselt kogumise päev.

Proteinuuria kvalitatiivne määratlus põhineb valgu denatureerimisel füüsikaliste või keemiliste teguritega. Kvalitatiivsed meetodid on seotud sõeluuringuga, mis võimaldab kindlaks teha valgu olemasolu uriinis, kuid ei anna võimalust proteinuuria astme täpseks hindamiseks.

Kasutatud proovid:

• keetmisega;
• sulfosalitsüülhape;
• lämmastikhape, reagendina Larionic Helleri tsükli proovis.

Sulfosalitsüülhappe proov viiakse läbi kontroll-uriiniproovi võrdlemisel kogenud prooviga, milles uriinile lisatakse 7-8 tilka 20% sulfosalitsüülhapet. Järeldus valgu olemasolu kohta tehakse vastavalt opalestseeruva hägususe intensiivsusele, mis ilmneb katseklaasis reaktsiooni ajal.

Kõige sagedamini kasutatav Gelleri test, kasutades 50% lämmastikhapet. Meetodi tundlikkus on 0,033 g / l. Sellise valgu kontsentratsiooniga katseklaasis uriiniproovi ja reagendiga 2-3 minutit pärast katse algust ilmub valge niidirõngas, mille moodustumine näitab valgu olemasolu.

Poolkvantitatiivsed meetodid hõlmavad järgmist:

• meetod valgu määramiseks uriini testribades;
• Brandberg-Roberts-Stolnikovi meetod.

Brandberg-Roberts-Stolnikovi meetodil põhinev määramismeetod põhineb Gelleri tsükli meetodil, kuid võimaldab valgu koguse täpsemat hindamist. Selle meetodiga katse tegemisel saavutavad mitmed uriini lahjendused niidisarnase valgusringi välimuse ajavahemikus 2–3 minuti möödumisel katse algusest.

Praktikas kasutatakse katseriba meetodit koos kasutatud värvi bromofenoolsinisega indikaatorina. Testribade puuduseks on selektiivne tundlikkus albumiini suhtes, mis põhjustab globuliinide või teiste valkude uriinikontsentratsiooni suurenemise korral tulemuse moonutamist.

Meetodi puudused on ka testi suhteliselt väike tundlikkus valgu suhtes. Testribad hakkavad reageerima valgu esinemisele uriinis valgu kontsentratsiooniga üle 0,15 g / l.

Kvantitatiivseid hindamismeetodeid võib jagada tingimuslikult:

Meetodid põhinevad valkude omadustel lahustuvuse vähendamiseks sideaine toimel koos halvasti lahustuva ühendi moodustumisega.

Valgu sidumist põhjustavad ained võivad olla:

• sulfosalitsüülhape;
• trikloroäädikhape;
• bensetooniumkloriid.

Katsete tulemuste põhjal tehakse järeldused, mis põhinevad valgusvoo nõrgenemise määral proovis suspensiooniga võrreldes kontrollprooviga. Selle meetodi tulemusi ei saa alati seostada usaldusväärsusega, kuna erinevused on järgmised: reaktiivide segunemise kiirus, temperatuur, keskkonna happesus.

Ei ole võimalik võtta mõju ravimite tarbimise hindamisele enne seda, kui enne nende meetoditega läbiviidud katseid tehakse:

• antibiootikumid;
• sulfonamiidid;
• joodi sisaldavad ravimid.

Meetod viitab kättesaadavale hinnaga, mis võimaldab seda laialdaselt kasutada sõelumiseks. Kuid täpsemaid tulemusi võib saada kallimate kolorimeetriliste meetodite abil.

Tundlikud meetodid, mis määravad täpselt valgu kontsentratsiooni uriinis, hõlmavad kolorimeetrilisi meetodeid.

Seda saab teha suure täpsusega:

• biureeti reaktsioon;
• tehnika Lowry;
• Värvimistehnikad, mis kasutavad värvaineid, mis moodustavad uriiniproteiinidega kompleksid, mis erinevad visuaalselt proovist.

Kolorimeetrilised meetodid valgu tuvastamiseks uriinis

Meetod viitab usaldusväärsele, väga tundlikule, võimaldades määrata uriini albumiinis, globuliinides, paraproteiinides. Seda kasutatakse peamise meetodina vastuoluliste testitulemuste selgitamiseks ning igapäevase uriiniproteiini määramiseks haiglate nefroloogiliste osakondadega patsientidel.

Veelgi täpsemaid tulemusi on võimalik saavutada Lowry meetodil, mis põhineb biureetireaktsioonil, samuti Folin-reaktsioonil, mis tunneb ära trüptofaani ja türosiini valgu molekulides.

Võimalike vigade kõrvaldamiseks puhastatakse uriiniproov aminohapetest, kusihappest dialüüsiga. Salitsülaatide, tetratsükliinide, klorpromasiini kasutamisel on vead võimalikud.

Kõige täpsem meetod valgu määramiseks põhineb selle omadusel, et seostuda värvainetega, mida kasutatakse:

• ponceau;
• Coomassie särav sinine;
• pürogalliline punane.

Päeva jooksul erineb uriiniga eritunud valgu kogus. Valgu kadumise uriinis objektiivsemaks hindamiseks tutvustage igapäevase valgu mõiste uriinis. Seda väärtust mõõdetakse grammides päevas.

Igapäevase valgu kiireks hindamiseks uriinis määratakse valgu ja kreatiniini kogus uriini ühes osas, seejärel valgu / kreatiniini suhe valgu kadumisest päevas suhe järgi.

Meetod põhineb asjaolul, et uriini kreatiniini eritumise kiirus on konstantne, ei muutu päeva jooksul. Terves inimeses on valgu ja kreatiniini normaalne suhe uriinis 0,2.

See meetod kõrvaldab võimalikud vead, mis võivad tekkida igapäevase uriini kogumisel.

Kvalitatiivsed testid annavad sagedamini kui kvantitatiivsed testid valepositiivseid või valepositiivseid tulemusi. Analüüsi eel tekivad ravimiga, toitumisharjumustega, kehalise aktiivsusega seotud vead.

Selle kvalitatiivse testi dekodeerimine toimub katseklaasi hägususe visuaalse hindamise teel, võrreldes katsetulemust kontrolliga:

1. nõrk positiivne reaktsioon on hinnanguliselt +;
2. positiivne ++;
3. järsult positiivne +++.

Gelleri rõngaskatse hindab täpsemalt valgu esinemist uriinis, kuid ei võimalda valgu kvantifitseerimist uriinis. Sarnaselt sulfosalitsüülhappe testiga annab Gelleri test ainult ligikaudse ettekujutuse uriini valgusisaldusest.

Meetod võimaldab hinnata proteinuuria ulatust kvantitatiivselt, kuid liiga aeganõudva, ebatäpse, kuna tugeva lahjendusega väheneb hindamise täpsus.

Valgu arvutamiseks tuleb uriini lahjendusaste korrutada 0, 033 g / l:

Test ei nõua eritingimusi, seda protseduuri on lihtne teha kodus. Selleks peate katseriba uriiniga 2 minutiks langetama.

Tulemused väljendatakse ribal olevate plusside arvuga, mille dekodeerimine on esitatud tabelis:

1. Testitulemused, mis vastavad väärtustele kuni 30 mg / 100 ml, vastavad füsioloogilisele proteinuuriale.
2. Testribade 1+ ja 2 ++ väärtused tähendavad olulist proteinuuria.
3. 3 +++, 4 ++++ väärtused on tähistatud neeruhaiguste põhjustatud patoloogilise proteinuuriaga.

Testribad määravad uriinis suurenenud valgu vaid ligikaudselt. Neid ei kasutata täpseks diagnostikaks ja isegi enam nad ei saa öelda, mida see tähendab.

Ärge laske testribadel piisavalt hinnata valgu kogust uriinis rasedatel naistel. Usaldusväärsem hindamismeetod on valgu määramine igapäevases uriinis.

Uriinvalgu määramine testribade abil:

Igapäevane valk uriinis on neerude funktsionaalse seisundi hindamise täpsem diagnoos. Selleks on vaja koguda kogu neerude kaudu eritunud uriin päevas.

Valgusisaldust uriinis võib leida valgu ja kreatiniini suhte vahel, andmed on toodud tabelis:

Valgu / kreatiniini suhte kehtivad väärtused on tabelis esitatud andmed:

Enam kui 3,5 g valgu kadumisega päevas nimetatakse seda seisundit massiivseks proteinuuriaks.

Kui uriinis on palju valku, on vaja uuesti läbi vaadata 1 kuu pärast, seejärel 3 kuu pärast vastavalt tulemustele, mis määravad, miks normi ületatakse.

Uriini valgu suurenemise põhjused on selle suurenenud produktsioon kehas ja neerude rikkumine, eristades proteinuuria:

• füsioloogilised - väikesed kõrvalekalded normist on tingitud füsioloogilistest protsessidest, lahenenud spontaanselt;
• patoloogilised muutused on tingitud neerude või teiste keha organite patoloogilisest protsessist, ilma et ravi toimuks.

Kerge valgu toitumise, mehaaniliste põletuste, vigastustega kaasneb valgu kerge suurenemine, millega kaasneb suurenenud immunoglobuliinide tootmine.

Kerge proteinuuria võib olla põhjustatud füüsilisest pingest, psühho-emotsionaalsest stressist või teatud ravimite võtmisest.

Füsioloogiline proteinuuria on uriiniproteiini suurenemine lastel esimestel päevadel pärast sündi. Kuid pärast elunädalat peetakse lapse uriini valgusisaldust kõrvalekaldena normist ja see näitab arenevat patoloogiat.

Neeruhaigus, nakkushaigused kaasnevad mõnikord ka valgusisaldusega uriinis.

Sellised seisundid vastavad tavaliselt kergele proteinuuria astmele, on mööduvad nähtused, mis liiguvad kiiresti, ilma eriravi nõudmata.

Raskemad seisundid, tõsine proteinuuria täheldatakse järgmistel juhtudel:

• glomerulonefriit;
• diabeet;
• südamehaigus;
• põie vähk;
• hulgimüeloom;
• infektsioon, ravimi kahjustus, polütsüstiline neeruhaigus;
• kõrge vererõhk;
• süsteemne erütematoosne luupus;
• Goodpasture'i sündroom.

Soole obstruktsioon, südamepuudulikkus ja hüpertüreoidism võivad põhjustada uriinis valgu jälgi.

Proteinuuria sordid liigitatakse mitmel viisil. Valkude kvalitatiivseks hindamiseks võib kasutada Yaroshevsky klassifikatsiooni.

1971. aastal loodud Yaroshevsky süstemaatika järgi eristatakse proteinuuria:

1. neerude - mis hõlmab glomerulaarfiltratsiooni rikkumist, tubulite valgu vabanemist, valkude taaskasutamise puudumist tubulites;
2. prerenal - esineb väljaspool neerusid, hemoglobiini eritumist, valke, mis esinevad liigse müeloomi tagajärjel veres;
3. Postrenal - tekib kuseteede kohas pärast neerusid, valgu eritumine kuseteede hävitamisse.

Kvantitatiivseks hindamiseks, mis toimub, on tingimata proteinuuria kraadi isoleeritud. Tuleb meeles pidada, et nad saavad ilma ravita kergesti raskemasse siseneda.

Proteinuuria kõige raskem staadium areneb rohkem kui 3 g valgu kadumisega päevas. Valgu kadu 30 mg kuni 300 mg päevas vastab mõõdukale faasile või mikroalbumuuriale. Kuni 30 mg valku igapäevases uriinis tähendab kerget proteinuuria.

Valgu norm uriinis, kui palju?

Normaalne valk uriinis praktiliselt puudub (alla 0,002 g / l). Kuid mõningatel tingimustel võib tervete isikute uriinis esineda väike kogus valku pärast suure koguse valgurikaste toiduainete allaneelamist, mis on tingitud emotsionaalse stressiga jahutamisest, pikaajalisest füüsilisest pingest (nn marssiv proteinuuria).

Märkimisväärne kogus valku uriinis (proteinuuria) on patoloogia. Proteiuriauria põhjuseks võib olla neeruhaigus (äge ja krooniline glomerulonefriit, püelonefriit, rase nefropaatia jne) või kuseteede (kusepõletik, eesnäärme, ureters). Neeru proteinuuria võib olla orgaaniline (glomerulaarne, tubulaarne ja liigne) ja funktsionaalne (febriilne proteinuuria, ortostaatiline noorukitel, imikute üleviimisel vastsündinutele). Funktsionaalne proteinuuria ei ole seotud neerupatoloogiaga. Valgu päevane kogus varieerub patsientidel 0,1 kuni 3,0 g või rohkem. Uriinvalkude koostis määratakse elektroforeesi abil. Bens-Jones'i valgu esinemine uriinis on iseloomulik müeloomile ja Waldenstrom macroglobulinemiale, # 223; 2 mikroglobuliine neerutorude kahjustumise korral.

Normaalne valk uriinis praktiliselt puudub (alla 0,002 g / l).

Uriini uuringus avastatud peamised haiguse tunnused.

SG Spetsiifiline kaal. Spetsiifilise kaalu vähenemine näitab neerude võime vähenemist uriini kontsentreerimisel ja kehast toksiinide eraldamisel, nagu see on neerupuudulikkuse puhul. Spetsiifilise kaalu suurenemine on seotud suure hulga suhkruga uriinis, soolades. Tuleb märkida, et ainult ühe uriinianalüüsi raskusastet ei ole võimalik hinnata, võib esineda juhuslikke muutusi, 1-2 korda uriinianalüüsi on vaja uuesti läbi viia.

Valgu proteiin uriinis - proteinuuria. Proteiuriauria põhjuseks võib olla neerude, amüloidoosi ja mürgiste kahjustuste kahjustamine. Uriinis sisalduv valk võib esineda ka kuseteede haiguste (püelonefriit, tsüstiit, prostatiit) tõttu.

Glükoosi glükoos (suhkur) uriinis - glükosuuria - kõige sagedamini diabeedi tõttu. Harvem põhjus on neerutorude hävitamine. On väga häiriv, kui ketoonkehad tuvastatakse koos suhkruga uriinis. See juhtub tõsise, sobimatu diabeedi korral ja see on diabeedi kõige raskemate tüsistuste - diabeetilise kooma.

Bilirubiin, Urobilinogeen Bilirubiin ja urobiliin määratakse uriinis erinevates kollatõve vormides.

Erütrotsüüdid Erütrotsüüdid uriinis - hematuuria. See juhtub kas neerude ennast kaotades, kõige sagedamini nende põletikuga või kuseteede haigustega patsientidega. Kui näiteks kivi liigub mööda neid, võib see kahjustada limaskesti, uriinis on punaseid vereliblesid. Kahjuv neeru kasvaja võib põhjustada ka hematuuriat.

Leukotsüüdid Leukotsüüdid uriinis - leukotsütouria, kõige sagedamini põletikuliste muutuste tagajärjel kusepõies patsientidel püelonefriidi, tsüstiidi korral. Leukotsüüte määravad sageli naiste väliste suguelundite põletik, meestel eesnäärme põletik.

Silindrid Silindrid on erilised mikroskoopilised struktuurid. Hüaliinisilindrid, mille kogus on 1-2, võivad olla terves inimeses. Nad moodustuvad neerutorudes, see on kokku pandud valguosakeste vahel. Kuid nende arvu suurenemine, muud tüüpi (graanulite, erütrotsüütide, rasvade) balloonid näitavad alati neeru kudede kahjustumist. Neerude põletikulistes haigustes on olemas balloonid, metaboolsed kahjustused, nagu näiteks diabeet.

Informatiivne meetod ja selle piirid. Neerude spetsiifiliste haiguste tuvastamiseks kasutatava üldise uriinianalüüsi infosisu on madal, tavaliselt on vaja täiendavaid täpsemaid uuringuid. Kuid uuringud on väga olulised, eriti ennetavate uuringute läbiviimisel, kuna see võimaldab tuvastada neeruhaiguse varajasi märke. Samuti on teada, et sageli esineb peitunud neeruhaigus, ja ainult uriiniuuring võimaldab neil kahtlustada ja teostada täiendavat vajalikku uurimist.

Enamikus laborites kasutatakse valgu uriini uurimisel kõigepealt kvalitatiivseid reaktsioone, mis ei tuvasta terve inimese valgusisaldust. Kui uriinis sisalduv valk tuvastatakse kvalitatiivsete reaktsioonide abil, viiakse läbi kvantitatiivne (või poolkvantitatiivne) määramine. Samal ajal on olulised kasutatavate meetodite tunnused, mis hõlmavad erinevat uroproteiinide spektrit. Seega, valgu määramisel, kasutades 3% sulfosalitsüülhapet, loetakse valgu kogus normaalseks kuni 0,03 g / l, kasutades pürogallooli meetodit, normaalsete valkude väärtuste piir suureneb 0,1 g / l-ni. Seoses sellega on analüüsivormis vaja näidata valgu normaalväärtus laboris kasutatava meetodi puhul.

Valgu minimaalsete koguste määramisel on soovitatav analüüs korrata, kahtluse korral tuleb määrata valgu igapäevane kadu uriinis. Normaalne igapäevane uriin sisaldab väikestes kogustes valku. Füsioloogilistes tingimustes imendub filtreeritud valk peaaegu täielikult proksimaalsete tubulite epiteelile ja selle sisaldus uriini päevases koguses varieerub vastavalt erinevatele autoritele jälgedest kuni 20 50, 80 100 mg ja isegi kuni 150 200 mg. Mõned autorid usuvad, et valgu päevane eritumine 30 50 mg / päevas on täiskasvanu füsioloogiline norm. Teised usuvad, et uriiniproteiini eritumine ei tohi ületada 60 mg / m2 kehapinda päevas, välja arvatud esimene elukuu, kui füsioloogilise proteinuuria väärtus võib olla neli korda kõrgem kui määratud väärtused.

Üldine tingimus valkude ilmnemiseks terve inimese uriinis on nende suhteliselt kõrge kontsentratsioon veres ja molekulmass mitte üle 100 200 kDa.

see ei ole norm, teie diagnoosiga on võimalik, teine ​​asi on see, et nefrootilise sündroomi puhul on see tegelikult väike näitaja. vaadake kliinikut - paistetust, survet jne.

ja veel ma ütlen: see on normaalne EI ole!