Patoloogiline proteinuuria on neeru ja kuseteede haiguste üks olulisemaid ja püsivamaid tunnuseid. Uriini valgu kontsentratsiooni määramine on uriini testimise oluline ja oluline element. Proteinuuria identifitseerimine ja kvantitatiivne hindamine on oluline mitte ainult paljude primaarsete ja sekundaarsete neeruhaiguste diagnoosimisel, vaid ka proteiiniaarsuse raskusastme muutuste hindamisel dünaamikas kaasneb teave patoloogilise protsessi kulgemise, ravi efektiivsuse kohta. Valgu tuvastamine uriinis, isegi väheses koguses, peaks olema häiriva võimaliku neeruhaiguse või kuseteede jaoks ja nõuab uuesti analüüsi. Eriti tähelepanuväärne on uriiniuuringute mõttetus ja eelkõige uriiniproteiini määramine, järgimata kõiki selle kogumise eeskirju.

Kõik valgusisalduse määramise meetodid uriinis võib jagada järgmiselt:

• Kvaliteet,
• Poolkvantitatiivne
• Kvantitatiivne.

Kvalitatiivsed meetodid

Kõik kõrgekvaliteedilised uriiniproteiini proovid põhinevad valkude võimel denatureeruda erinevate füüsikaliste ja keemiliste tegurite mõjul. Valgu juuresolekul uriini proovis esineb hägusust või flokulentsete setete kadumist.

Valkude määramise tingimused uriinis hüübimisreaktsiooni põhjal:

1. Uriin peaks olema happeline. Leeliseline uriin hapestatakse mitme (2–3) tilga äädikhappega (5–10%).
2. Uriin peab olema selge. Hägusus kõrvaldatakse paberfiltri kaudu. Kui hägusus ei kao, lisage talk või põletatud magneesium (umbes 1 tl 100 ml uriini kohta), raputage ja filtreerige.
3. Kvalitatiivne katse tuleb läbi viia kahes torus, millest üks on kontroll.
4. Hägususe otsing peab olema valgustatud valguses mustal taustal.

Valgu kvalitatiivsed määramise meetodid uriinis on:

Nagu on näidatud arvukates uuringutes, ei võimalda ükski suur hulk tuntud meetodeid valgu kvalitatiivseks määramiseks uriinis usaldusväärsete ja reprodutseeritavate tulemuste saamiseks. Sellest hoolimata kasutatakse enamikus Venemaal asuvates CDL-des neid meetodeid laialdaselt skriininguna - positiivse kvalitatiivse vastusega uriinis viiakse läbi valkude kvantifitseerimine. Kvalitatiivsetest reaktsioonidest kasutatakse sagedamini Gelleri testi ja sulfosalitsüülhappega proovi, kuid enamasti peetakse sulfosalitsüülhappega proovi patoloogilise proteinuuria tuvastamiseks kõige sobivamaks. Keemistesti ei kasutata praegu praktiliselt töömahukuse ja kestuse tõttu.

Poolkvantitatiivsed meetodid

Brandberg-Roberts-Stolnikovi meetod põhineb Gelleri tsükli testil, seega on sama meetodiga samad vead nagu Gelleri testis.

Praegu kasutatakse uriiniproteiini määramiseks üha enam diagnostilisi ribasid. Valgu osaline kvantitatiivne määramine uriinis ribal on kõige sagedamini kasutatav värviks tsitraatpuhvris bromofenoolsinine. Uriini valgusisaldust hinnatakse sinise rohelise värvi intensiivsuse järgi, mis tekib pärast reaktsioonitsooni kokkupuudet uriiniga. Tulemust hinnatakse visuaalselt või kasutades uriini analüsaatoreid. Hoolimata kuiva keemia meetodite suurest populaarsusest ja ilmsetest eelistest (lihtsus, analüüsi kiirus), ei ole need uriinianalüüsid üldjuhul ja valkude määramine eriti tõsised puudused. Üks neist, mis põhjustab diagnostilise informatsiooni moonutamist, on bromofenoolsinisest indikaatorist suurema tundlikkusega albumiin võrreldes teiste valkudega. Sellega seoses on testribad peamiselt kohandatud selektiivse glomerulaarse proteinuuria tuvastamiseks, kui peaaegu kõiki uriini valke esindab albumiin. Muutuste progresseerumisel ja selektiivse glomerulaarse proteinuuria muutumisel mitteselektiivseks (globuliinide ilmumine uriinis) on valgu määramise tulemused alahindatud võrreldes tegelike väärtustega. See asjaolu muudab võimatuks kasutada seda meetodit valgu määramiseks uriinis, et hinnata neerude seisundit (glomerulaarfilter) aja jooksul. Tubulaarse proteinuuria puhul on ka valgu määramise tulemused alahinnatud. Valgu määramine diagnostiliste ribade abil ei ole usaldusväärne näitaja proteinuuria madalast tasemest (enamikul praegu kättesaadavatest diagnostilistest ribadest ei ole võimalik valku uriinis püüda kontsentratsiooniga alla 0,15 g / l). Valkude määramise negatiivsed tulemused triibudel ei välista globuliinide, hemoglobiini, uromukoidi, Bens-Jones'i valgu ja teiste paraproteiinide olemasolu uriinis.

Suure glükoproteiinisisaldusega lima helbed (näiteks kuseteede põletikulistes protsessides, püuuria, bakteriuria) võivad libiseda riba indikaatortsoonile ja põhjustada valepositiivseid tulemusi. Valepositiivsed tulemused võivad olla seotud ka karbamiidi suure kontsentratsiooniga. Halb valgustus ja halb värvi tajumine võivad põhjustada ebatäpseid tulemusi.

Sellega seoses peaks diagnostiliste ribade kasutamine piirduma sõelumismenetlustega ning nende abiga saadud tulemusi tuleks käsitleda vaid soovituslikena.

Kvantitatiivsed meetodid

Valkude õige kvantitatiivne määramine uriinis ei ole mõnel juhul kerge ülesanne. Selle lahendamise raskused määravad järgmised tegurid:

• madala valgusisaldusega tervisliku inimese uriinis, sageli kõige tuntumate meetodite tundlikkuse künnisel;
• paljude ühendite olemasolu uriinis, mis võivad mõjutada keemiliste reaktsioonide kulgu;
• märkimisväärsed kõikumised uriiniproteiinide sisalduses ja koostises mitmesugustes haigustes, mis raskendavad sobiva kalibreerimismaterjali valimist.

Kliinilistes laborites kasutatakse enamasti niinimetatud rutiinseid meetodeid valgu määramiseks uriinis, kuid need ei anna alati rahuldavaid tulemusi.

Laboris töötava spetsialisti analüüsi seisukohalt peab uriiniproteiini kvantitatiivseks määramiseks ettenähtud meetod vastama järgmistele nõuetele: t

• neil on lineaarne seos keemilise reaktsiooni käigus moodustunud kompleksi imendumise ja valgusisalduse vahel proovis paljudes kontsentratsioonides, vältides seega täiendavaid toiminguid uuringu jaoks proovi ettevalmistamisel;
• peaks olema lihtne, ei vaja kõrgelt kvalifitseeritud esitajat, tuleb teha väikese arvu toimingutega;
• uuritud materjali väikeste koguste kasutamisel on kõrge tundlikkus, analüütiline usaldusväärsus;
• olema resistentsed erinevate tegurite suhtes (valimi koostise erinevused, ravimite olemasolu jne);
• omama vastuvõetavat hinda;
• olema kergesti kohandatav autoanalüsaatoritega;
• määramise tulemus ei tohiks sõltuda uriiniproovi valgu koostisest.

Ükski praegu teadaolevatest meetoditest valgu kvantitatiivseks määramiseks uriinis ei saa väita, et see on "kuldstandard".

Kvantitatiivseid meetodeid valgu määramiseks uriinis saab jagada turbidimeetriliseks ja kolorimeetriliseks.

Turbidimeetrilised meetodid

Turbidimeetrilised meetodid hõlmavad järgmist:

• valgu määramine sulfosalitsüülhappega (SSC), t
• valgu määramine trikloroäädikhappega (THC), t
• valgu määramine bensetooniumkloriidiga.

Turbidimeetrilised meetodid põhinevad uriiniproteiinide lahustuvuse vähendamisel suspendeeritud osakeste suspensiooni moodustumise tõttu sadestavate ainete mõju all. Uuritava proovi valgusisaldust hinnatakse kas valguse hajumise intensiivsuse järgi, mis on määratud valguse hajutavate osakeste arvuga (nefelomeetriline analüüsimeetod) või valguse voolu nõrgendamisega saadud suspensiooni poolt (turbidimeetriline analüüsimeetod).

Valguse hajumise ulatus sademe meetodites valgu avastamiseks uriinis sõltub paljudest teguritest: reaktiivide segamise kiirusest, reaktsioonisegu temperatuurist, söötme pH-st, võõrühendite olemasolust, fotomeetria meetoditest. Reaktsioonitingimuste hoolikas järgimine aitab kaasa konstantse osakeste suurusega stabiilse suspensiooni moodustumisele ja suhteliselt reprodutseeritavate tulemuste saamisele.

Mõned ravimid mõjutavad turbidimeetriliste meetodite tulemusi valgusisalduse määramiseks uriinis, mille tulemuseks on nn valepositiivsed või vale-negatiivsed tulemused. Nende hulka kuuluvad mõned antibiootikumid (bensüülpenitsilliin, kloksatsilliin jne), radioaktiivsed joodi sisaldavad ained, sulfa ravimid.

Turbidimeetrilised meetodid on halvasti standarditud, põhjustades sageli vigaseid tulemusi, kuid vaatamata sellele kasutatakse neid nüüd laborites laialdaselt tänu reaktiivide madalale maksumusele ja kättesaadavusele. Kõige levinum meetod Venemaal on valgu määramine sulfosalitsüülhappega.

Kolorimeetrilised meetodid

Kõige tundlikumad ja täpsemad on kolorimeetrilised meetodid uriini koguproteiini määramiseks, mis põhinevad spetsiifilistel värvvalgu reaktsioonidel.

Nende hulka kuuluvad:

1. biureetide reaktsioon,
2. Lowry meetod
3. meetodid, mis põhinevad erinevate värvide võimel moodustada valkudega komplekse:
   • Ponceau S (Ponceau S)
   • Coomassie Brilliant Blue Coomassie Brilliant Blue
   • Pyrogallol punane.

Esitaja seisukohast on laboratooriumi igapäevases töös suure uurimustööga biureetide meetod ebamugav tänu suurele arvule operatsioonidele. Samal ajal iseloomustab meetodit kõrge analüütiline usaldusväärsus, võimaldab määrata valku mitmesugustes kontsentratsioonides ja tuvastada võrreldava tundlikkusega albumiini, globuliine ja paraproteiine, mille tulemusena peetakse biureetmeetodit võrdluseks ja soovitatakse teiste valkude määramiseks kasutatavate analüütiliste meetodite võrdlemiseks uriinis. Valgu määramiseks uriinis viiakse biureetmeetod eelistatavalt läbi nefroloogia osakondi teenindavates laborites ja seda kasutatakse juhtudel, kui määramise tulemused teiste meetoditega on küsitavad, samuti määrata päevase valgu kadumise summa nefroloogilistel patsientidel.

Lowry meetod, mille tundlikkus on suurem kui biureetide meetod, ühendab biureetreaktsiooni ja Folini reaktsiooni aminohapetega türosiini ja trüptofaaniga valgu molekulis. Kõrge tundlikkusest hoolimata ei anna see meetod uriini valgusisalduse määramisel alati usaldusväärseid tulemusi. Selle põhjuseks on Folini reaktiivi mittespetsiifiline koostoime uriini mittevalguliste komponentidega (kõige sagedamini aminohapped, kusihape, süsivesikud). Nende ja teiste uriinikomponentide eraldamine dialüüsi või valgu sadestamisega võimaldab seda meetodit edukalt kasutada uriini valgu kvantitatiivseks määramiseks. Mõned ravimid - salitsülaadid, klorpromasiin, tetratsükliinid suudavad seda meetodit mõjutada ja moonutada uuringu tulemusi.

Piisav tundlikkus, hea reprodutseeritavus ja valkude määramise lihtsus värvainete sidumise abil teevad need meetodid paljutõotavaks, kuid reagentide kõrge hind takistab nende laiemat kasutamist laborites. Praegu muutub pürogallooli punane meetod Venemaal tavalisemaks.

Proteuuria taseme uuringu läbiviimisel tuleb meeles pidada, et proteiuriauria määramise erinevatel meetoditel on erinevad tundlikkus ja spetsiifilisus paljude uriiniproteiinide suhtes.

Empiiriliste andmete põhjal on soovitatav valk määrata kahe erineva meetodiga ja arvutada tegelik väärtus, kasutades ühte järgmistest valemitest:

proteinuuria = 0,4799 B + 0,5230 l;
proteinuuria = 1,5484 B - 0,4825 S;
proteinuuria = 0,2167 S + 0,7579 L;
proteinuuria = 1,0748 P - 0,0986 B;
proteinuuria = 1,0104 P - 0,0289 S;
proteinuuria = 0,8959 P + 0,0845 L;

kus:
B - mõõtetulemus Coomassie G-250-ga;
L on Lowry reaktiivi mõõtmistulemus;
P - mõõtetulemus pürogalloolmolübdaadiga;
S on sulfosalitsüülhappe mõõtmistulemus.

Arvestades proteinuuria taseme olulisi kõikumisi erinevatel kellaaegadel, samuti uriiniproteiini kontsentratsiooni sõltuvust diureesist, selle erineva sisalduse kohta üksikute uriiniosade puhul, on nüüd tavaline, et neeru patoloogia hindab proteinuuria raskusastet uriini igapäevase valgu kadu tõttu, st. igapäevane proteinuuria. Seda väljendatakse grammides päevas.

Kui uriini ei ole võimalik koguda, on soovitatav määrata valgu ja kreatiniini kontsentratsioon ühel uriini annusel. Kuna kreatiniini vabanemise kiirus päeva jooksul on üsna konstantne ja ei sõltu urineerimise kiiruse muutustest, on valgu kontsentratsiooni suhe kreatiniini kontsentratsiooniga konstantse. See suhe korreleerub hästi valgu igapäevase eritumisega ja seetõttu võib seda kasutada proteinuuria raskusastme hindamiseks. Normaalne valgu / kreatiniini suhe peaks olema väiksem kui 0,2. Valku ja kreatiniini mõõdetakse g / l. Valk-kreatiniini suhe proteinuuria raskusastme hindamise meetodi oluline eelis on igapäevase uriini võimetuse või mittetäieliku kogumisega seotud vigade täielik kõrvaldamine.

Kirjandus:

• O. V. Novoselova, M. B. Pyatigorskaya, Yu E. Mikhailov, "Proteinuuria avastamise ja hindamise kliinilised aspektid", CPL juhi käsiraamat, nr 1, jaanuar 2007
• A. V. Kozlov, "Proteinuuria: selle avastamise meetodid", loeng, Peterburi, SPbMAPO, 2000
• VL Emanuel, “Neeruhaiguse laboratoorsed diagnoosid. Kuseteede sündroom ”, - KDLi juhi käsiraamat, nr 12, detsember 2006
• V.I. Pupkova, L.M. Prasolov - valgu määramine uriinis ja tserebrospinaalvedelikus. Koltsovo, 2007
• Kliiniliste laboriuuringute meetodite käsiraamat. Ed. E. A. Kost. Moskva, "Meditsiin", 1975

Seotud artiklid

Koguselised meetodid uriini valgu määramiseks

Iga uriiniproov sobib valgu kvantifitseerimiseks. Enamik uurijaid eelistavad määrata päevase valgu koguse uriinis, et kindlaks teha igapäevane valgu kadu.

Jaotis: Uriini analüüs

Poolkvantitatiivsed meetodid uriini üldvalgu määramiseks

Praegu kasutatakse uriiniproteiini määramiseks üha enam diagnostilisi ribasid. Valgu osaline kvantitatiivne määramine uriinis ribal on kõige sagedamini kasutatav värviks tsitraatpuhvris bromofenoolsinine. Uriini valgusisaldust hinnatakse sinise rohelise värvi intensiivsuse järgi, mis tekib pärast reaktsioonitsooni kokkupuudet uriiniga.

Jaotis: Uriini analüüs

Kvalitatiivsed meetodid uriini üldvalgu määramiseks

Kõik kõrgekvaliteedilised uriiniproteiini proovid põhinevad valkude võimel denatureeruda erinevate füüsikaliste ja keemiliste tegurite mõjul. Valgu juuresolekul uriini proovis esineb hägusust või flokulentsete setete kadumist.

Jaotis: Uriini analüüs

Uriinvalgu määramine proovis 20% sulfosalitsüülhappega

20% sulfosalitsüülhappe proov viitab kvalitatiivsetele reaktsioonidele valgu määramiseks uriinis. Kuna see põhineb hüübimisreaktsioonil, peab uuritud uriin vastama teatud nõuetele: olema läbipaistev ja happeline.

Jaotis: Uriini analüüs

Gelleri rõnga katse

Geller-tsükli test on kvalitatiivne reaktsioon uriini valgu määramiseks. Kuna see põhineb hüübimisreaktsioonil, peab uuritud uriin vastama teatud nõuetele: olema läbipaistev ja happeline.

Jaotis: Uriini analüüs

Meetodid valgu määramiseks uriinis

Väikeses koguses uriinis leiduvat valku leitakse ka täiesti tervetest isikutest, kuid selliseid väikesi kontsentratsioone ei tuvastata üksikutes portsjonites, kasutades praegu kasutatavaid meetodeid. Umbes 70% terve inimese uriiniproteiinidest moodustavad uromukoidi, mis on neerukoe produkt; seega on glomerulaarvalgu osakaal tervete inimeste uriinis tühine ja proteinuuria on tavaliselt 50–150 mg päevas, kusjuures enamik uriini valke on identsed vadakuga.

On lubatud eristada järgmiseid proteinuuria vorme sõltuvalt päritolukohast: prerenal, mis on seotud suurenenud koe valgu lagunemisega, raske hemolüüs; neerude neerude patoloogia tõttu, mida võib jagada glomerulaar- ja tubulaarseks; postrenal, mis on seotud kuseteede patoloogiaga ja mida põhjustab kõige sagedamini põletikuline eritumine.

Sõltuvalt eksistentsi kestusest eraldavad nad püsivat proteinuuria, mis eksisteerib mitu nädalat ja isegi aastaid ning on mööduv, mis ilmneb perioodiliselt, mõnikord isegi neeruhaiguse puudumisel, näiteks palaviku ja tugeva mürgistuse korral. Soovitatav on eristada proteinuuria varieeruvust: päevane valgu kadu kuni 1 g - mõõdukas, 1 kuni 3 g - keskmiselt ja üle 3 g - väljendub.

Suhteliselt suure molekulmassiga valkude tuvastamine uriinis näitab neerufiltri selektiivsuse ja selle väljendunud kahjustuste puudumist. Sellistel juhtudel rääkige proteinuuria madalast selektiivsusest. Seetõttu on praegu uriiniproteiini fraktsioonide määratlus laialt levinud. Kõige täpsemad meetodid on elektroforees tärklises ja polüakrüülamiidi geelides.
Nende meetodite abil saadud tulemuste põhjal võib hinnata proteinuuria selektiivsust.

Enamik kvalitatiivseid ja kvantitatiivseid meetodeid valgu määramiseks uriinis põhinevad selle koagulatsioonil uriini mahus või söötme (uriini ja happe) vahelises liideses; kui on olemas võimalus koagulatsiooni intensiivsuse mõõtmiseks, siis muutub proov kvantitatiivseks.

Ühendatud sulfosalitsüülhappe analüüs:

Nõutav reaktiiv:

20% sulfosalitsüülhappe lahus.

Uuringu käik:

Kahes katseklaasis valatakse 3 ml filtreeritud uriini. Katseklaasis lisatakse 6-8 tilka reaktiivi. Tume taustal võrrelda kontrolltoru kogenud. Katsetoru hägusus näitab valgu olemasolu, proovi peetakse positiivseks.

Kui uriini reaktsioon on leeliseline, hapestatakse enne uurimist 2-3 tilka 10% äädikhappe vesilahust.

Brandberg-Roberts-Stolnikovi ühtne meetod:

Meetod põhineb Gelleri tsükli proovil, mis seisneb selles, et lämmastikhappe ja uriini piiril toimub valgu juuresolekul selle koagulatsioon ja ilmub valge rõngas.

Nõutav reaktiiv:

30% lämmastikhappe lahust (suhteline tihedus 1,2) või reagenti Larionic.
Reagendi valmistamine Larion: 20-30 g naatriumkloriidi lahustatakse kuumutades 100 ml destilleeritud vees, lastakse jahtuda, filtreeritakse. 99 ml filtraati valatakse 1 ml kontsentreeritud lämmastikhapet.

Uuringu käik:

1-2 ml lämmastikhapet (või Larionic acid reagenti) valatakse torusse ja hoolikalt üle toru seina, sama kogus filtreeritud uriini on kihiline. Õhuke valge rõnga ilmumine kahe vedeliku liidese vahel 2. ja 3. minuti vahel näitab valgu esinemist kontsentratsioonis ligikaudu 0,033 g / l. Kui rõngas ilmub varem kui 2 minutit pärast kihistamist, tuleb uriin veega lahjendada ja juba lahjendatud uriini uuesti kihistada. Uriini lahjendusaste valitakse sõltuvalt tsükli tüübist, s.t. selle laius, kompaktsus ja välimus. Varem 2 minuti jooksul ilmunud niiditaolise rõngaga lahjendatakse uriini 2 korda, laia 1–4 korda, kompaktselt üks - 8 korda jne. Valgu kontsentratsioon arvutatakse, korrutades 0,033 lahjendusastmega ja väljendatakse grammides 1 l (g / l) kohta.

Mõnikord saadakse suur hulk uraate sisaldav valge rõngas. Erinevalt valgurõngast on uraat veidi kõrgem kahe vedeliku piirist ja lahustub kergelt kuumutamisel.

Valgu kvantitatiivne määramine uriinis hägususe tõttu, mis saadakse sulfosalitsüülhappe lisamisega: t

Meetodi põhimõte:

Hägususe intensiivsus sulfosalitsüülhappega valgu koagulatsiooni ajal on proportsionaalne selle kontsentratsiooniga.

Nõutavad reaktiivid:

1. 3% sulfosalitsüülhappe lahus.

2. 0,9% naatriumkloriidi lahus.

3. Standardne albumiini lahus - 1% lahus (1 ml lahust, mis sisaldab 10 mg albumiini): 1 g lüofiliseeritud albumiini (inimese või veise seerumist) lahustatakse väikeses koguses 0,9% naatriumkloriidi lahuses kolvis mahuga 100 ml ja seejärel reguleeritakse sama lahusega märgini. Reaktiiv stabiliseeritakse, lisades 1 ml 5% naatriumasiidi lahust (NaN3). Kui külmkapis hoitakse, on reaktiiv 2 kuud.

Erivarustus - fotoelektriline kolorimeeter.

Uuringu käik:

Torusse valatakse 1,25 ml filtreeritud uriini, täiendatakse 5% -ni 3% sulfosalitsüülhappe lahusega ja segatakse. 5 minuti pärast mõõdetakse neid fotoelektrilisel kolorimeetril lainepikkusel 590–650 nm (oranž või punane valgusfilter), mis on kontrollitud rakus optilise tee pikkusega 5 mm. Kontroll on toru, milles lisati kuni 1,25 ml 0,9% naatriumkloriidi lahust 1,25 ml filtreeritud uriini. Arvutus tehakse vastavalt kalibreerimisgraafikule, mille valmistamiseks valmistatakse lahjendused standardlahusest, nagu on näidatud tabelis.

Igast saadud lahusest võetakse 1,25 ml ja töödeldakse katseproovidena.

Kalibreerimisgraafiku ülesehitamisel säilitatakse ristlõike sõltuvus kuni 1 g / l. Suurematel kontsentratsioonidel tuleb proov lahjendada ja võtta arvesse lahjendusarvutust.

Kui uriini sisaldavad orgaanilised joodid on kontrastained, võib saada valepositiivseid tulemusi. Seetõttu ei saa testi kasutada joodipreparaate kasutavatel isikutel; valepositiivne tulemus võib olla tingitud ka sulfanilamiidi preparaatidest, suurtest penitsilliiniannustest ja suurest kontsentratsioonist kusihappe uriinis.

Biureti meetod:

Meetodi põhimõte:

Valgu peptiidsidemed leeliselises C vasksooladega moodustavad lilla värvi kompleksi. Valgud on eelnevalt sadestunud trikloroäädikhappega.

Nõutavad reaktiivid:

1. Trikloroäädikhappe 10% lahus.
2. 20% vasklahus (CuSO4 × 5H2O).
3. 3% NaOH lahus.

Uuringu käik:

Päevasest kogusest võetud 5 ml uriinile lisatakse 3 ml trikloroäädikhappe lahust, tsentrifuugitakse konstantse koguse sette hulka. Supernatant imetakse pipetiga välja, sade lahustatakse seejärel 5 ml NaOH lahuses. Lahusele lisatakse 0,25 ml CuSO4, segu segatakse ja tsentrifuugitakse. Supernatant fotomeetriseeritakse lainepikkusel 540 nm küvetis, mille optilise tee pikkus on 10 mm destilleeritud vee vastu. Valgu kontsentratsioon arvutatakse kalibreerimiskõvera põhjal, joonistades seejuures valgu kontsentratsioon (g / l) y-teljel ja optiline tihedus väljasuremisüksustes abstsissteljel. Saadud kontsentratsiooni põhjal arvutatakse valgu igapäevane kadu uriinis.

Indikaatorpaberi (ribade) kasutamine:

Valku saab tuvastada indikaatorpaberi (ribade) abil, mida toodavad “Albuphan”, “Ames” (Inglismaa), „Albustix”, „Boehringer” (Saksamaa), „Comburtest” jne.

Põhimõte põhineb mõningate happe-aluse näitajate niinimetatud valgu vea ilmingul. Paberi indikaatorosa on küllastunud tetrabromofenooli sinise ja tsitraatpuhvriga. Paberi niisutamisel lahustub puhver ja annab indikaatorreaktsiooni jaoks sobiva pH.

3,0-3,5 aminohappejäägiga reageerivad valkude rühmad indikaatoriga ja muudavad selle esialgset kollast värvi roheliseks siniseks, pärast mida on võrreldes värviskaalaga võimalik ligikaudselt hinnata valgu kontsentratsiooni uriinis. Indikaatorribade õige toimimise peamiseks eeltingimuseks on saada pH vahemikus 3,0-3,5, et reaktsioon toimuks.

Kui paber on kokkupuutes uuritava uriiniga pikem kui juhendis määratletud ekspositsioon, lahustub tsitraatpuhver selles ja seejärel indikaator reageerib uriini tegelikule pH-le, s.t. annab valepositiivse reaktsiooni. Kuna puhvervõimsus on piiratud, isegi kui suuniseid järgitakse liiga aluselise uriini proovides (pH> 6,5), saadakse valepositiivseid tulemusi ja liiga happelise uriini proovides (pH 6,5) uriini madala suhtelise tihedusega proovides. uriini ja bens jones'i valgu madala kontsentratsiooniga.

Nõutavad reaktiivid:

2 M atsetaatpuhver pH 4,9.

Uuringu käik:

Filtreeritud uriin koguses 4 ml segatakse 1 ml puhvriga ja kuumutatakse 15 minutit veevannis temperatuuril 56 ° C. Bens-Jones'i valkude juuresolekul ilmneb 2 minuti jooksul ilmne sade ja kui Bens-Jones'i valgu kontsentratsioon on alla 3 g / l, võib proov olla negatiivne. Praktikas on see väga haruldane, kuna enamasti on Bens-Jones'i valgu kontsentratsioon uriinis märkimisväärne.

Täieliku kindlusega saab Bens-Jones'i valku tuvastada immunoelektroforeetilise uuringuga, kasutades spetsiifilisi seerumeid immunoglobuliinide raske ja kerge ahela vastu.

Albumosise (proteoosi) määramine:

Albumoosid on valgu lõhustumise produktid, mille põhimõte põhineb sellel, et nad ei keeta keetmisel, kuid annavad positiivse biureetireaktsiooni ja soolad soolade, eriti ammooniumsulfaadi ja tsinkatsetaadiga happelises keskkonnas.

Normaalne uriin ei sisalda albumusit. Spermi lisandite korral võivad jäljed olla normaalses uriinis. Patoloogias võib albumosis esineda uriinis palavikutingimuste, vere- ja vereplasmaülekannete, eksudaatide ja transudaatide resorptsiooni ning tuumorite lagunemise korral.

Nõutavad reaktiivid:

1. Küllastunud naatriumkloriidi lahus.
2. Kontsentreeritud naatriumhüdroksiidi lahus.
3. Vase sulfaadi nõrk lahus (peaaegu värvitu).

Uuringu käik:

Äädikhappega hapestatud uriinile lisatakse naatriumkloriidi küllastunud lahus (1/3 mahuosa), keedetud ja kuum vedelik filtreeritakse. Albumoosid sisenevad filtraati, milles nende olemasolu määratakse biureetide reaktsiooniga. Filtraadile lisatakse 1/2 mahuosa kontsentreeritud naatriumhüdroksiidi lahust ja paar tilka nõrka vasksulfaadi lahust. Positiivse prooviga saadakse punakasvioletne värvus.

Positiivse testiga sulfosalitsüülhappega kuumutatakse uriini. Kui hägusus kaob ja ilmub uuesti, kui see on jahutatud, tähendab see, et uriin sisaldab albumesi või Bens-Jones'i proteiinikeha.

Valk uriinis, laboratoorsed testid

Meetodid uriini valgu määramiseks

Kliiniku jaoks on tegemist nii valgu kvalitatiivse kui kvantitatiivse määramisega uriinis.

Kvalitatiivsed testid uriini valgu määramiseks
Soovitati üle 100 reaktsiooni valgu kvalitatiivseks määramiseks uriinis. Enamik neist põhinevad valgu sadestamisel füüsikaliste (kuumutamise) või keemiliste vahendite abil. Valgu olemasolu tõestab hägususe ilmumine.

Huvipakkuvad on ka kolorimeetrilised kuivad proovid.

Allpool kirjeldatakse ainult proovi praktikas kõige olulisemaid.

Sulfostsüülhappe analüüs. Mõne milliliitri uriini lisage 2-4 tilka 20% sulfosalitsüülhappe lahust. Kui positiivne reaktsioon ilmneb hägususes. Tulemust tähistatakse terminitega: opalüüs, nõrgalt positiivne, positiivne või tugev positiivne reaktsioon. Sulfosalitsüülhappe test on üks tundlikumaid valke valgusisalduse määramiseks uriinis. Ta leiab, et uriini valgusisaldus on isegi väikseim. Tänu lihtsale tehnikale on see test leidnud laialdast kasutamist.

Test aseptooliga. Aseptool on sulfosalitsüülhappe asendaja. Seda saab valmistada materjalidest, mis on saadaval mis tahes laboris (fenool ja väävelhape). Reagendina kasutatakse 20% aseptooli lahust. Katse viiakse läbi järgmiselt: 2-3 ml uriini sisaldavas katseklaasis lisatakse 0,5-1-1 ml aseptooli lahust põhja. Kui kahe vedeliku vahelisel piiril ilmneb koaguleeritud valgu valge rõngas, on proov positiivne.

Gelleri test. Mõne milliliitri uriini puhul soolatakse 1-2 ml 30% lämmastikhapet (erikaal) 1,20. Kui mõlema vedeliku liidesel tekib valge rõngas, on proov positiivne. Reaktsioon muutub positiivseks, kui valk on suurem kui 3,3 mg. Mõnikord saadakse suur hulk uraate sisaldav valge rõngas. Erinevalt valgurõngast ei esine uraatrõngas kahe vedeliku vahel, vaid veidi kõrgemal. Larionova teeb ettepaneku kasutada 30% lämmastikhappe asemel reagendina 1% lämmastikhappe lahust küllastunud naatriumkloriidi lahuses; See säästab lämmastikhapet.

Proovige zhelezüstosinerodisty kaaliumi ja äädikhappega. See reaktsioon võimaldab nukleiinalbumiinist eraldada seerumi valke.

Ühtsed kogused uriini valatakse kahte torusse. Ühes neist lisatakse mõned tilgad 30% äädikhappe lahust. Kui hägusus saavutatakse võrreldes kontrolltoruga, sisaldab uriin nukleoalbumiini. Kui hägusust ei ilmne, segatakse mõlema katseklaasi sisu ja jagatakse uuesti kaheks osaks. Ühes kahest katseklaasist lisatakse 10% kollase veresoola (kaaliumferrotsüaniidisiirup) lahusest paar tilka (liigne kogus võib muuta positiivse proovi negatiivseks). Vadakuvalgu juuresolekul saadakse hägusus.

Kontsentreeritud uriiniga, mis sisaldab suures koguses kusihapet ja uraati, tuleb pärast ferriidi esialgset lahjendamist (2-3 korda) veega viia ferri ja siirupi kaaliumi ja äädikhappega proov. Vastasel juhul võib tekkida sadestunud kusihappe tekitatud hägusus.

See on eriti oluline imikute uriini uurimisel, mis sisaldab palju kusihapet ja uraate.

Ülejäänud valgusisalduse proovidest uriinis, mis põhinevad valgu sadestamisel, leidsid nad rakendust: keemistesti, Esbach, Perdi, Roberts, Almen, Balloni, Buro, Claudius, Corso, Dome, Goodmann-Suzanne, Jolla, Exton, Kamlet, Kobuladze, Liliendal-Petersen, Polacci, Pons, Spiegler, Tanre, Thiele, Brown, Tsushia jne.

Valkude sadestamisel valgusisaldusega valkude kvaliteetsete proovide valmistamisel on vaja järgida järgmisi üldreegleid, mille rikkumine põhjustab uuringus olulisi vigu.

1. Uuritav uriin peab olema happeline. Leeliselise reaktsiooniga hapestatakse uriin äädikhappega kergelt. Proovi valmistamine leeliselise uriiniga juhtudel, kui hapet kasutatakse reagendina, võib viia happe neutraliseerimisele ja positiivse reaktsiooni negatiivsele tulemusele. See kehtib eriti sulfosalitsüülhappe testi kohta, kuna hapet lisatakse väga väikestes kogustes ja seda on lihtne neutraliseerida.

2. Uuritud uriin peab olema läbipaistev.

3. Proovid valgu määramiseks uriinis tuleb alati teha kahes katseklaasis, millest üks toimib kontrollina. Ilma kontrolltoruta ei pruugi reaktsioonide ajal tekkida kerge hägusus.

4. Proovides lisatud happe kogus ei tohiks olla liiga suur. Suur hulk hapet võib põhjustada lahustuva acidolbumiini moodustumist ja positiivse proovi muutumist negatiivseks.

Tänu oma lihtsale tehnikale väärivad kolorimeetrilised kuivad proovid suurt tähelepanu. Kui neid proove kasutatakse, siis mõju, mis valgul on indikaatori värvile puhverlahuses (nn valgu vea indikaatorid). Sidrunhappe puhvriga ja bromofenoolsinisega infundeeritud filterpaber imendub lühikese aja jooksul uriiniga. Proov on positiivne, kui see muutub sinine-roheliseks. Võrreldes värvi intensiivsust värvipaberi standarditega on võimalik tuletada ligikaudseid ja kvantitatiivseid järeldusi. Indikaatorpaberit müüakse vastavates värvistandardites, nagu universaalne indikaatorpaber.

Uriinvalgu kvantitatiivse määramise meetodid
Uriinvalgu kvantitatiivseks määramiseks on välja pakutud mitmeid meetodeid. Bioloogilises materjalis sisalduvate valkude määramise täpseid kvantitatiivseid meetodeid ei kasutata keeruliste ja aeganõudvate meetodite tõttu uriini valgu määramisel. Mahulised meetodid on laialt levinud, eriti Esbachi meetod. Nad on väga lihtsad, kuid kahjuks ei ole need väga täpsed. Kliinikusse sobivad ka Brandberg-Stolnikovi rühma meetodid, mis annavad täpsemad tulemused kui mahumeetodid suhteliselt lihtsa tehnikaga. Fotomeetri või neelomeetri juuresolekul on ka nefelomeetrilised meetodid mugavad.

Esbachi meetod. Ta pakkus välja Pariisi arsti Esbachi poolt 1874. aastal. Eraldi toru (Esbachi albuminomeeter) valatakse uriini ja reaktiivi. Toru suletakse kummikorgiga, segatakse põhjalikult (ilma peksamiseta) ja jäetakse püstiasendisse kuni järgmise päevani. Teatage jagunemisest, mis jõuab valgu sademe kolonni. Leitud number näitab valgusisaldust. Esbachi meetodil on väga oluline, et uriin oleks happeline. Leeliseline uriin võib neutraliseerida reaktiivi happelised koostisosad ja takistada valkude sadestumist.

Meetodi eelised: see on praktikas lihtne ja mugav.

Puudused: meetod on ebatäpne, tulemus saadakse 24–48 tunni pärast.

Brandberg-Stolnikovi meetod. See põhineb Gelleri kvaliteedikatsel. Gelleri proovi võib kasutada kvantitatiivseks määramiseks, kuna see annab positiivse tulemuse, mille valgusisaldus on üle 3,3 mg. See on lõplik valgu kontsentratsioon, millest allpool muutub proov negatiivseks.

Ehrlichi ja Althauseni muutmine. Nõukogude teadlased S. L. Ehrlich ja A. Ya Altgauzen muutsid Brandberg-Stolnikovi meetodit, näidates ära võimalusi lihtsustada uurimistööd ja säästa aega oma tootmises.

Esimene lihtsustamine on seotud ringi ajaga. See määratakse täpselt tema välimuse ajaks, järgimata tingimata 2. ja 3. minutit.

Teine lihtsustamine võimaldab kindlaks teha, millist aretust tuleks teha. Autorid on näidanud, et nõutav lahjendus võib olla ligikaudu kindlaks määratud saadud ringi tüübi järgi. Nad eristavad filamentset, laia
ja kompaktne rõngas.

Neelomeetrilistest meetoditest väärib märkimist Kingsberry ja Clarki meetod. 2,5 ml filtreeritud uriini valatakse väikesesse gradueeritud silindrisse, millele on lisatud 3% sulfosalitsüülhappe vesilahus kuni 10 ml. Segage hoolikalt ja 5 minuti pärast fotomeeter 1 cm küvetis, kollase filtriga, kasutades kompenseerimisvedelikuna vett. Pulfrichi fotomeetriga saadakse ekstinktsioon korrutatuna 2,5-ga, andes valgu koguse% o. Juhul, kui ekstinktsiooniindeks on kõrgem kui 1,0, lahjendatakse uriini 2 korda, 4 korda või isegi rohkem.

Selleks, et saada selge ülevaade uriiniga eritunud valkude kogusest, on vaja määrata mitte ainult nende kontsentratsioon uriini eraldi osas, vaid ka nende kogu päevane kogus. Selleks koguda patsiendi uriin 24 tunni jooksul, mõõta selle maht milliliitrites ja määrata valgu kontsentratsioon iga päev uriinis g%. 24 tunni jooksul uriiniga eritunud valkude kogus määratakse sõltuvalt uriini päevast kogusest grammides.

Valgu kliiniline tähtsus uriinis

Inimese uriin sisaldab tavaliselt minimaalseid valgu koguseid, mida ei ole võimalik kindlaks teha tavaliste kvalitatiivsete uriiniproteiini testimise proovidega. Suure valgusisalduse eritumine, kus tavapärased kõrgekvaliteedilised proovid uriini valgu suhtes muutuvad positiivseks - ebanormaalne nähtus, mida nimetatakse proteinuuriaks. Proteinuuria on füsioloogiline ainult vastsündinutel, esimese 4-10 päeva jooksul pärast sündi. Tavaliselt kasutatav albuminuuria nimi on vale, sest mitte ainult albumiin, vaid ka muud valgu liigid (globuliinid jne) erituvad uriiniga.

Proteinuuria kui diagnostiline sümptom avastati 1770. aastal Cotuno poolt.

Kõige olulisem funktsionaalne neeru proteinuuria lastel on järgmine:

1. Vastsündinu füsioloogiline proteinuuria. See esineb enamikus vastsündinutel ja sellel puudub kahjulik tähtsus. See on seletatav ebaküpsete neerufiltri, sünnide kahjustuste või vedelike kadumisega esimestel elupäevadel. Füsioloogiline proteinuuria kaob 4-10. Päeval pärast sündi (enneaegsetel imikutel). Valgu kogus on väike. See on nukleoalbumiin.

Vastsündinute albumiinia, mis kestab kaua, võib olla kaasasündinud luuste sümptom.

2. Stroke albuminuuria. Neid põhjustab neerufiltri normaalse ärrituvuse künnise ületamine oluliste mehaaniliste, termiliste, keemiliste, vaimsete ja muude ärrituste tõttu - vedeliku kadu imikutel (dehüdratsioon proteinuuria), külma suplemine, rohkesti valgurikast toitu (seedetrakti proteinuuria), neeru palpatsioon (palpeeriv albuminuuria), füüsiline ületöötamine, hirm jne

Stroke albuminuuria ilmneb lastel kergemini varases eas kui vanematel lastel ja täiskasvanutel, sest imiku ja väikelapse neerud on kergemini ärritunud. Dehüdratsiooni albuminuuria (toitumishäired, hüdroliseeruvus, toksiktoos, kõhulahtisus, oksendamine) on imikutel eriti levinud.

Stroke albuminuuria on healoomuline. Nad kaovad kohe pärast nende põhjuste kõrvaldamist. Mõnikord leidub sedimentides aeg-ajalt leukotsüüte, silindreid ja punaseid vereliblesid. Valk on kõige sagedamini nukleoalbumiin.

3. Ortostaatiline proteinuuria. See tingimus on iseloomulik eelkooliealistele ja kooliealistele lastele. See toimub neerude verevarustuse vasomotoorse häire alusel. Ortostaatiline albuminuuria (seega ka tema nimi) on tüüpiline, et see ilmneb alles siis, kui laps seisab, kui selg on lordootilises asendis. Lamavas asendis kaob see. Nukleoalbumiin vabaneb. Kahtluse korral võite kasutada ortostaatilist kogemust, mis koosneb järgmisest: õhtul, üks tund enne lamamist, tühjendab laps põie; hommikul voodist välja astudes vabastab ta uuesti uriini. See uriin ei sisalda valke. Siis pannakse laps põlvili 15–30 minuti tagant selja taga, mõlema käe küünarnukkide vahel painutatud. See loob lordoosi positsiooni, mis viib valgu vabanemiseni ilma setete muutusteta.

Ortostaatilise albuminuuria korral võib päevas vabastada 8–10 g valku.

Orgaaniline neeru proteinuuria on kogu proteinuuria vahel olulise kliinilise tähtsusega. Neid põhjustavad orgaanilised neeruhaigused (nefriit, nefroos, nefroskleroos). Proteinuuria on orgaanilise neeruhaiguse üks olulisemaid ja kõige tuntumaid sümptomeid.

1. Ägeda ja kroonilise glomerulonefriidi korral esineb regulaarselt proteinuuria. Valgu kogus on mõõdukas ja proteinuuria astme ja haiguse tõsiduse vahel ei ole paralleeli. Seevastu krooniline ja raskem jade esineb sageli väiksema valgu kogusega kui äge. Ägeda nefriidi korral, mõnikord ka pikka aega (aastaid), leitakse uriinis väikeses koguses valku, millel ei ole patoloogilist tähtsust ("albumiinia jääk"). Ei tohiks unustada, et võib esineda ka „proteinuuriata nefriit”. Mõnikord leidub valku ühes uriini osas ja teises ei ole. Akuutse nefriidi albumiini ja globuliinide suhe on madal ja kroonilise nefriidi korral on see suurem.

2. Nefroskleroosi korral on uriinis olevate valkude kogus tähtsusetu, sageli leidub sageli valku sisaldavaid haiguse vorme uriinis.

3. Kõigist neeruhaigustest esineb nefroos kõige tugevama proteinuuriaga.

4. Nakkuslike ja toksiliste seisundite korral leitakse nn palavik ja toksiline proteinuuria. Need on äge nefroos, milles valgu kogus on väike. Sellesse rühma kuuluvad ka proteinuuria konvulsiivsetes seisundites (krambid), hüpertüreoidism, kollatõbi, invaginatsioonid, enterokoliit, põletused, raske aneemia jne. Need albuminuuriad on healoomulised ja liiguvad kiiresti (mööduv albuminuuria).

5. Kui neerudes on veri stagnatsioon, tekib nn kongestiivne albuminuuria, mis on iseloomulik südame-veresoonkonna patsientidele dekompensatsioonietapis. Seda leidub ka kõhu ascites ja kasvajates.

Febriilse, toksilise ja kongestiivse albuminuuria korral on neerufiltri suurenenud läbilaskvus eriti ilmne. Mõnede autorite sõnul tekivad paljud nendest proteinuuriast ilma neeru parenhüümi orgaanilise kahjustuseta.

Ekstrarenaalset albuminuuriat põhjustavad tavaliselt valgu lisandid (sekretsioonid, lagunenud rakud), mida eritavad haiged kuseteede ja suguelundid. Sageli leiti tsütopeliitist (püuuriast) tingitud ekstraleenne albuminuuria, harvemini vulvovaginiidi, kalkulaatori ja kuseteede kasvajate tõttu.

Kui ekstrarenaalne albuminuuria setetes leiab suurt hulka leukotsüüte ja baktereid. Neerufunktsioone ei esine peaaegu kunagi. Valgu kogus on väike. Filtreeritud või tsentrifuugitud uriin ei anna tavaliselt positiivset valgu proovi.

Püeliidist taastuvatel inimestel kaob albumiinia pärast bakteriauria ja püuuriat.

Tüüpilise nähtusena tuleb rõhutada, et varases lapsepõlves on orgaanilised neeruhaigused väga haruldased, seetõttu on ka orgaaniline proteinuuria haruldane. Neist on leitud peamiselt palavik ja toksilised. Erinevalt orgaanilisest proteinuuriast on insult albuminuuria väikelastel väga levinud.

Vanematel lastel on orgaaniline proteinuuria sagedamini funktsionaalne. Üldiselt, koos vanusega, on funktsionaalne proteinuuria vähem levinud ja orgaaniline sagedamini.

Valkude elektroforeetilised uuringud uriinis

Mitmed autorid kasutavad uriinis leiduvate valkude uurimiseks elektroforeetilist meetodit (uroproteiinid). Saadud elektroforegrammist on selge, et neil on sama kvalitatiivne koostis nagu plasmavalkudega. See näitab, et uriinis olevad valgud pärinevad plasmavalkudest.

Valgu kvalitatiivne ja kvantitatiivne määramine uriinis.

Normaalväärtused: normaalne valk uriinis sisaldub minimaalsetes kogustes, mida tavalised kvalitatiivsed reaktsioonid ei tuvasta. Valgu normi ülemine piir uriinis on 0,033 g / l. Kui valgusisaldus on sellest väärtusest kõrgem, muutuvad kvaliteetsed valgu proovid positiivseks.

Määratluse kliiniline tähtsus:

Valgu esinemist uriinis nimetatakse proteinuuriaks. Proteinuuria võib olla vale ja neerud. Ekstrarenaalne proteinuuria võib esineda suguelundite (vaginiit, uretriit jne) valgu päritolu lisandite juures, samas kui valgu kogus on ebaoluline - kuni 0,01 g / l. Neeru proteinuuria võib olla funktsionaalne (hüpotermia, füüsiline koormus, palavik) ja orgaaniline - glomerulonefriidi, püelonefriidi, nefriidi, nefroosi, neerupuudulikkusega. Neeru proteinuuria korral võib valgusisaldus olla 0,033 kuni 10-15 g / l, mõnikord kõrgem.

Meetodi põhimõte põhineb asjaolul, et anorgaaniliste hapete toimel valk koaguleerub (muutub nähtavaks). Hägususe aste sõltub valgu kogusest.

Valgu tuvastamine uriinis 20% sulfosalitsüülhappega.

Reaktiivid: 20% sulfosalitsüülhappe lahus. Varustus: tume taust.

1. Nõuded uriinile: uriin peab olema happeline (või kergelt happeline), peab olema läbipaistev, selleks on uriin tsentrifuugitud. Leeliseline uriin hapestatakse nõrgalt happeliseks reaktsioonikeskkonnaks, kasutades kontrollimiseks paberit.

2. Kahe sama läbimõõduga katseklaasis valatakse 2 ml ettevalmistatud uriini. 1 katseklaas - kontroll, 2 - kogemus. Katseklaasi lisatakse 4 tilka 20% sulfosalitsüülhapet.

3. Tulemus on märgitud tumedale taustale.

4. Valgu juuresolekul kasvab katseklaasis olev uriin häguseks.

Kvaliteediga valgu määramine uriinis testribade abil.

Proteuriauria kindlakstegemiseks kasutatakse erinevaid monotest ribasid: Albufani, Albustiks, Biofani E ja poliitilisi teste: Triscan, Nonafan jt.

Valgu tuvastamine uriinis Roberts - Stolnikovi meetodil.

Meetodi põhimõte põhineb asjaolul, et anorgaaniliste hapete toimel valk koaguleerub (muutub nähtavaks). Hägususe aste sõltub valgu kogusest (st Geller-tsükli test). Kui valgu kontsentratsioon uriinis on 0,033 g / l, ilmub 3 minuti jooksul pärast uriini kihistumist õhuke valge niit.

Reaktiivid: lämmastikhappe või Roberts 'reagendi 50% lahus (98 osa naatriumkloriidi küllastunud lahust ja 2 osa kontsentreeritud vesinikkloriidhapet) või Larionic'i reaktiiv (98 osa naatriumkloriidi küllastunud lahust ja 2 osa kontsentreeritud lämmastikhapet).

Varustus: tume taust.

1. Nõuded uriinile: uriin peab olema happeline (või kergelt happeline), peab olema läbipaistev, selleks on uriin tsentrifuugitud. Leeliseline uriin hapestatakse nõrgalt happeliseks reaktsioonikeskkonnaks, kasutades kontrollimiseks paberit.

2. Valage katseklaasi 2 ml 50% lämmastikhappe lahust või ühte reagenti, seejärel valage pipeti abil ettevaatlikult sama kogus ettevalmistatud uriini piki toru seina.

3. Proov jäetakse 3 minutiks seisma

4. 3 minuti pärast teatage tulemusest. Tulemus on tähistatud tumedal taustal edastatud valguses. Kui rõngas on lai, kompaktne, lahjendatakse uriin destilleeritud veega ja asetatakse uuesti reaktiivi.

5. Uriini lahjendatakse kuni 3 minuti pärast moodustatakse õhuke kiud.

6. Valgusisalduse arvutamine uriinis valmistatakse järgmise valemi järgi:

C = 0,033 g / l x lahjendusastet.

194.48.155.245 © studopedia.ru ei ole postitatud materjalide autor. Kuid annab võimaluse tasuta kasutada. Kas on autoriõiguste rikkumine? Kirjuta meile | Tagasiside.

Keela adBlock!
ja värskenda lehte (F5)
väga vajalik

Praktiliste klasside metoodiline arendamine "Valgu määramine uriinis" (1 kursus)

Kapitali koolituskeskus
Moskva

Teema: uriiniproteiini määramine.

Eesmärk: Uurida uriini keemiliste omaduste uurimist.

Uurida kvantitatiivseid ja kvalitatiivseid meetodeid uriini valgu määramiseks;

Lugege automaatanalüsaatorite testribadega töötamise põhiprintsiipe.

Töö tüüp: praktiline (6 tundi)

Õpilane peaks teadma:

Kvalitatiivsed proovid valgu määramiseks.

Roberts - Stolnikovi meetod.

Valgu 3% SSC määramine.

Biureti valgu määramise meetod (THU).

Teadusnäitajate diagnostiline väärtus.

Õpilane peaks suutma:

Valmistage töökoht uriinianalüüsi tegemiseks.

Valmistage uurimiseks ette reaktiivid, nõud ja seadmed.

Määrata uriini keemilised omadused (valk valgus kvalitatiivsete ja kvantitatiivsete meetoditega).

Tööd tühjade toodetega (analüüsivormide kujundus).

Tõlgendage uuringu tulemusi õigesti.

Eesmärgi saavutamise vahendid:

1. Töö märkmete, haridusliku ja erialase kirjandusega.

2. Praktiliste harjutuste ettevalmistamine, kasutades õpetaja metoodilisi soovitusi, praktilise töö rakendamist ja läbiviimist.

3. Töötada infotehnoloogia abil elektroonilises ja paberkandjal.

Seadmed õppe- ja kontoritöökohtadele:

kohtade arv õpilaste arvu järgi;

õpetaja töökohal;

spetsialiseerunud mööbel ja seadmed.

Tehnilised koolitusvahendid:

arvutid õpetaja ja õpilaste töökohale;

Tehnilised seadmed audiovisuaalseks teabe esitamiseks;

audiovisuaalsed õppevahendid (esitlus, koolitusvideo).

Õppetundide omandamise tulemus on:

Praktiliste erialaste oskuste ja esmase praktilise kogemuse loomine, sealhulgas professionaalsed (PC) ja üldised (QA) pädevused:

PC 1.1. Valmistage ette töökohad laboratoorsete kliiniliste uuringute jaoks.

PC 1.2. Viia läbi bioloogiliste materjalide laboratoorsed kliinilised uuringud.

Arvuti 1.3. Registreerige uuringu tulemused.

PC 1.4. Visake kasutatud materjal ära, desinfitseerige ja steriliseerige kasutatud laboratoorsed klaasnõud, tööriistad ja kaitsevahendid.

OK 1. Mõista oma tulevase elukutse olemust ja sotsiaalset tähtsust, näidata pidevat huvi selle vastu.

OK 2. Korraldage oma tegevused, valige standardmeetodid ja professionaalsete ülesannete täitmise viisid, hindage nende tõhusust ja kvaliteeti.

OK 6. Töötage meeskonnas ja meeskonnas, suhtle tõhusalt kolleegidega, juhtkonna ja patsientidega.

OK 9. Juhinduda tehnoloogia muutumisest kutsetegevuses.

OK 13. Korraldada töökoha, mis vastab töökaitse, tööstushügieeni, nakkushaiguse ja tuleohutuse nõuetele.

I moodul. Teoreetiline osa iseseisva töö elementidega

Ülesande number 1. Uurige ja visandage töövihikute õppematerjale.

Tervislik inimene sisaldab tavaliselt vähem kui 0,002 g / l ja harva kuni 0,012 g / l valku, ja tavaliselt nimetatakse seda uriini valgusisaldust "jälgede kujul" ja seda ei tuvastata tavapäraste keemiliste meetoditega inimese terves uriinis.

Valgu sisaldus uriini erinevates päevadel kogutud osades võib oluliselt erineda.

Valku uriinis nimetatakse proteinuuriaks.

Sõltuvalt valgu igapäevastest kadudest eristatakse järgmisi proteinuuria astmeid: mõõdukas - kuni 1 g; keskkond - 1 kuni 3 g; hääldatud - üle 3 g.

Proteinuuria on kaks peamist tüüpi:

Proteinuuria, mis on põhjustatud kuseteede haigustest;

proteinuuria, neerude kahjustused (haigused).

Proteinuuria, mis on seotud kuseteede põletikuliste protsessidega, millega kaasneb märkimisväärne hulk leukotsüütide või erütrotsüütide esinemist uriinis, mis aga ei kõrvalda samaaegset valgu neeruparenhüümist sissetungimist uriiniga valgu sisaldus harva ületab 1 g / l.

Neeru proteinuuria on enamikul juhtudel seotud glomerulite läbilaskvuse suurenemisega ja jaguneb kaheks rühmaks:

Füsioloogilisse proteinuuria hulka kuuluvad juhud, kui valk on ajutiselt uriinis, mis ei ole seotud haigustega:

pärast suurtes kogustes toitu, mis sisaldab palju denatureerimata valke (toores liha, toores munad);

intensiivse lihastööga (pikad matkad, spordiüritused);

külma vanniga või duši all;

tugevad emotsionaalsed kogemused;

epilepsiahoogudega.

Eraldage ortostaatiline või nooruslik, proteinuuria, mis esineb lastel ja noorukitel ning vananedes. Diferentsiaal-diagnostilises seoses on praktiline tähtsus, et ortostaatiline albuminuuria esineb sageli ägeda glomerulonefriidi taastumisperioodil.

Patoloogiline neeru proteinuuria võib olla tingitud neerude ja teiste organite ja süsteemide orgaanilistest haigustest: äge glomerulonefriit; krooniline glomerulonefriit; äge püelonefriit; krooniline püelonefriit; rasedate nefropaatia; mitmesugused palavikuga seotud haigused; raske krooniline südamepuudulikkus; ja kerge neeruhaigus; lipoidne nefroos; neerutuberkuloos; hemorraagilised palavikud; hemorraagiline vaskuliit; raske aneemia; hüpertensioon jne.

Ülesande number 2. Valgu määramiseks uriinis laboratoorsete meetodite ümberkirjutamine ja joonistamine.

Laboratoorsed meetodid valgu määramiseks uriinis

Valgu määramiseks uriinis on kvalitatiivsed ja kvantitatiivsed meetodid, need põhinevad valgu koagulatsioonil uriini mahus või sööde piiril (uriin ja hape); koagulatsiooni määra mõõtmisel teeb proov proovid kvantitatiivseks.

proov 20% sulfosalitsüülhappega (standarditud);

Gelleri rõnga katse (praegu ei kasutata);

valgu tuvastamine indikaatorpaberi (ribade) ja testribade abil.

ühtne Brandberg-Roberts-Stolnikovi meetod;

3% sulfosalitsüülhappega.

Kvalitatiivsed meetodid valgu määramiseks uriinis

Ülesande number 3. Valgu määramine uriinis, kasutades standardiseeritud proovi 20% sulfosalitsüülhappega

Meetodi põhimõte: põhineb valgu koagulatsioonil uriini mahus või sööde piiril (uriin ja hape).

Nõud, seadmed ja reaktiivid:

20% sulfosalitsüülhape (2-hüdroksü-5-sulfobensoehape C ₇ H ₅ 0 ₆ S).

3 ml filtreeritud uriin

2 tükki keemilised katseklaasid

Kolme toruga filtritud uriini viiakse kahte katseklaasi, ühele neist (kogenud) lisatakse 6-8 tilka sulfosalitsüülhapet. Tume taustal võrreldakse mõlemaid torusid.

Tulemuste tõlgendamine:

Katseklaasis sisalduv optiliseerumine näitab valgu esinemist uriinis - proov on positiivne.

Märkus Leeliseline uriin hapestatakse enne katset, lisades mõned tilgad 10% äädikhappe lahust.

Ülesande nr 4 ülesanne. Valgu määramine Gelleri tsükli testi abil

Meetodi põhimõte: Rõngasproov põhineb asjaolul, et kui lämmastikhape lisatakse liidese (happe-uriini) uriinile valgu juuresolekul, koaguleerub see ja ilmub valge rõngas.

Nõud, seadmed ja reaktiivid:

- reaktiivid: 30% lämmastikhappe lahus (HNO 3) (d = 1,2) või laryoonreaktiiv: 20–30 g naatriumkloriidi (NaCl), mis on lahustatud 100 ml destilleeritud vees kuumutamisel, jahutamisel, filtreerimisel; 99 ml filtraadile lisatakse 1 ml kontsentreeritud HN03.

Torusse valatakse 1 - 2 ml 30% HNO3 või Larionova reaktiivi lahust ja kihistatakse õrnalt sama kogus filtreeritud uriini seinale.

Tulemuste tõlgendamine:

Kahe vedeliku piiri ilmumine õhukese valge rõnga 2. ja 3. minuti vahel näitab valgu esinemist uriinis.

Joonistage skeem valgu määramiseks

Valgu kvantifitseerimine

Meetodi põhimõte: Gelleri rõngasproov põhineb asjaolul, et kui lämmastikhape lisatakse liidese (happe-uriini) uriinile valgu juuresolekul, koaguliseerub ja ilmub valge rõngas.

Nõud, seadmed ja reaktiivid:

Bioloogiline vedelik (uriin);

Torusse valatakse 1 - 2 ml 30% HNO3 või Larionova reaktiivi lahust ja kihistatakse õrnalt sama kogus filtreeritud uriini seinale.

Tulemuste tõlgendamine:

Välimus kahe vedeliku piiril 2. ja 3. minuti vahel
õhuke valge rõngas näitab valgu esinemist kontsentratsioonis ligikaudu 0,033 g / l. Kui rõngas ilmub varem kui 2 minutit pärast lamineerimist, tuleb uriin lahjendada destilleeritud veega ja uuesti läbi viia lahjendatud uriiniga. Uriini lahjendusaste valitakse sõltuvalt rõnga tüübist, selle laiusest, kompaktsusest ja välimuse ajast.

Varem 2 minuti jooksul ilmunud niiditaolise rõngaga lahjendatakse uriini 2 korda, laia 1–4 korda, kompaktselt üks - 8 korda jne. Valgu kontsentratsioon arvutatakse lahjenduse korrutamisel 0,033 g / l.

Kui uraatide arv on suur, võib moodustada valge rõngas; erinevalt valgust, tundub see veidi üle kahe vedeliku piiri ja lahustub kergelt kuumutamisel.

Ülesande nr 6 ülesanne. Valgu koguse määramine uriinis 3% sulfosalitsüülhappega

Meetodi põhimõte: valgu kontsentratsioon uriinis on proportsionaalne hägususega, mis tekib, kui see koaguliseerib sulfosalitsüülhapet

Nõud, seadmed ja reaktiivid:

0,9% naatriumkloriidi lahus;

1% albumiini standardlahus - 1 g lüofiliseeritud albumiini (inimese või veise seerumist) lahustatakse väikeses koguses 0,9% NaCl lahuses kolvis mahuga 100 ml ja seejärel täiendatakse märgini sama lahustiga. Reaktiiv stabiliseeritakse, lisades 1 ml 5% naatriumasiidi lahust (NaN3). Külmkapis säilitamisel on reaktiiv stabiilne 2 kuud.

Katseklaasi viiakse 1,25 ml filtreeritud uriini, lisatakse 3,75 ml 3% sulfosalitsüülhappe lahust ja segatakse. 5 minuti pärast valgustatakse proov PEC-il lainepikkusel 590–650 nm (oranž või punane valgusfilter) kontrolliga küvetis, mille optilise tee pikkus on 5 mm. Kontroll toimib proovina, milles 1,25 ml uriinile lisatakse 3,75 ml 0,9% naatriumkloriidi lahust. Valgu kontsentratsioon arvutatakse vastavalt kalibreerimisgraafikule, mille konstrueerimiseks valmistatakse nad standardse albumiini lahuse lahjendusi. (vt tabelit). Igast saadud lahjendatud lahusest võetakse 1,25 ml ja töödeldakse katsenäidisena.

Lahjenduste ettevalmistamine kalibreerimiseks

Standardlahus, ml

0,9% naatriumkloriidi lahus, ml

Valgu kontsentratsioon, g / l

Ekstinktsiooni ja valgu kontsentratsiooni suuruse sujuv sõltuvus säilib kuni 1 g / l. Suurema valgu kontsentratsiooni korral tuleb proov lahjendada ja arvestada lahjendust.

Kui uriinis on joodi sisaldavaid aineid, on võimalik saada valepositiivseid tulemusi. Seetõttu ei saa testi kasutada joodipreparaate kasutavatel patsientidel või uuringutel, mis kasutavad joodi sisaldavaid kiirguskindlaid ühendeid. Valepositiivsed J-reaktsioonid uuringu ajal võivad olla põhjustatud sulfanilamiidi ravimite, penitsilliini suurte annuste võtmisest ja kusihappe uriinis suurtest kontsentratsioonidest.

Joonistage skeem valgu määramiseks

Ülesande number 7. Bens-Jones'i avastamine uriinis

Meetodi põhimõte: põhineb reaktsiooni termosadestamisel

Nõud, seadmed ja reaktiivid:

Reagent: 2M atsetaatpuhver pH 4,9.

4 ml filtreeritud uriini segatakse 1 ml puhverlahusega ja kuumutatakse 15 minutit veevannis temperatuuril 56 ° C.

Tulemuste tõlgendamine:

Bens-Jones'i valgu juuresolekul uriinis ilmneb esimese 2 minuti jooksul ilmne sediment.

Kui valgu kontsentratsioon on alla 3 g / l, võib proov olla negatiivne, mis on üsna haruldane, kuna tavaliselt on Bens-Jones'i valgu kontsentratsioon uriinis väga oluline.

Bens-Jones'i valgu kõige usaldusväärsem tuvastamine on sadestumine temperatuuril 40-60 ° C. Liiga happelises (pH alla 3,0) või liiga leeliselise (pH üle 6,5) uriinis, kus uriini suhteline tihedus on väike ja Bens-Jones beež (madalam kui 3 g / l), ei pruugi settimine toimuda.

Joonistage skeem valgu määramiseks

II moodul. Sõltumatu töö uurimisetapiga

Ülesande number 1. Uurige ja kirjeldage rakendust nr 1 "Valgu tuvastamine diagnostiliste testribade abil"

- Saage õpetajalt bioloogilise vedeliku (uriini) proovid, proovide arv;

- Viia läbi uriinianalüüs diagnostiliste testribade abil;

- Hinda tulemust (norm, patoloogia). Oletame valgu põhjus uriinis.

- Kirjutage analüüsitulemused, edastage need õpetajale.

"Valgu tuvastamine diagnostiliste testribade abil"

Põhimõte Valk muudab ribal oleva indikaatori värvi. Indikaatorid on pakitud 100 ribasse, mida hoitakse tihedalt suletud pliiatsikarbis jahedas ja kuivas kohas.

Diagnostiliste testribadega töötamise eeskirjad

Diagnostiliste testribadega töötamisel peate järgima järgmisi reegleid:

- hoida diagnostilisi testribasid tihedalt suletud pakendites;

- ladustada juhtumeid pimedas, kuivas ja jahedas kohas temperatuuril, mis ei ületa 30 ° C, kuid mitte külmkapis;

- Ärge jätke ribasid niiskuse ja otsese päikesevalguse, kõrge temperatuuri ja lenduvate kemikaalide kätte;

- saada ainult rangelt vajalik arv ribasid ja sulgege see koheselt;

- Ärge puudutage sõrmedega diagnostilisi tsoone.

Testireeglid

1. Uuringu läbiviimiseks kasutage ühekordselt kasutatavast plastikust uriinikonteinerit (või puhta kuiva tassi) kogutud hommikust uriini. Segage tarnitud uriin, kuid ärge tsentrifuugige.

Mittestandardselt reguleeritud pakendi kasutamisel põhjustavad puhastusvahendi jäägid uriinikogumismahutis valeandmeid.

2. Võtke pliiatsikarpist katseriba.

3. Sulgege kohv koheselt tehase kaanega, kaitske riba niiskuse eest.

4. Langetage indikaatorpaberi ribad 2-3 sekundiks uuritavasse uriini ja eemaldage need kohe.

5. Liigse niiskuse eemaldamiseks riba diagnostilistest tsoonidest kasutage seda pika servaga mööda konteineri serva (või muud konteinerit, kus uriin on tarnitud) või kinnitage see riba serv filterfiltrile.

Uriini liigne eemaldamine diagnostilistest tsoonidest on võimatu.

6. Pärast kanistrite etiketil või iga katse juhendis märgitud aja möödumist, võrdle vastava diagnostilise tsooni värvust värvi skaalaga kanistrite etikettidel (standard). Katsemenetlus on esitatud joonistel 1-7.

7. Reaktsiooni hinnatakse positiivseks või negatiivseks. Või väljendatuna arvuliselt g / l. (vt joonist nr 8).